Cromosomas de ratón

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Baño maría a 37ªC.

Microscopio.

Material biológico: Ratones de 2 meses y medio de edad y de 25 a 30 g de peso.

Método:

Sacrificar al ratón por dislocación cervical, después de una hora. Colocar al animal en la tabla de disección y disecar los dos fémures, cortar las cabezas, femorales, extraer la medula ósea inyectando 5 ml de solución hipotónica, previamente incubada a 37ªC por el extremo superior del fémur. El líquido debe fluir a través del hueso de tal forma que arrastre la medula ósea.

Colectar la medula ósea en tubos cónicos, encubar en el baño maría por 20 minutos. Transcurrido el tiempo, centrifugar al 1500 rpm durante 10 minutos, desechar el sobrante.

Primera fijación, agregar lentamente 5 ml de fijador con agitación continua. Dejar reposar 10 minutos. Centrifugar a 1500 rpm por un lapso de 10 minutos, desecha el sobrante y repetir estos pasos dos veces más, serán un total de 3 fijaciones.

Al finalizar la última centrifugación, re suspender el botón celular en 0.5 ml de fijador limpio y frío.

En un portaobjetos desengrasado y glaciado, dejar caer con una pipeta Pasteur 3 gotras de la suspensión desde una altura de 20 cm como mínimo (entre más altura, mejor) y dejarlas secar al aire las laminillas.

Cubrir las laminillas durante 10 minutos con colorante Giemnsa diluido en agua, eliminar en exceso de colorante bajo el chorro de agua, secar al aire las preparaciones,

Observar al microscopio a seco débil, seco fuerte e inmersión. Analizar en metafase completa y bien extendida la morfología y el número cromosómico

Discusión de resultados:

En esta práctica se observaron los cromosomas en la medula ósea de los ratones. Es una práctica un tanto difícil, ya que se debe de matar al ratón para poder abrirlo y sacar los fémures de estos para poder obtener los cromosomas.

En este método, se utilizan células de medula ósea del ratón (mamífero), por estar más vascularizada y por contener una población de células de ciclo corto que pueden aislarse y tratarse con facilidad.

Los resultados de esta práctica fueron los deseados; se obtuvo una cantidad alta de suspensión, pero desagradablemente no se pudo observar los cromosomas de la medula ósea del ratón, ya que cuando se agregó el colorante Giemsa no se disolvió con agua destilada; no se tenía en cuenta que antes de colocar este colorante se tenía que disolver este con agua destilada. El colorante por si solo es muy fuerte para teñir, entonces esto fue lo que provoco que los cromosomas no se observaran de la forma adecuada; aparte, en el momento de colocar el colorante este se manchó por atrás de este y no se secó a tiempo; también este fue un motivo para que los cromosomas obtenidos no se pudieran observar al microscopio.

Conclusión:

Como conclusión podemos comprobar que en cada célula hay 40 cromosomas, pudimos ver la morfología de sus cromosomas, aunque en algunas muestras se tiñeron de más en otras se podía observar bien el juego de cromosomas.

Bibliografía.

Adler. I. D. 1984 Cytogenetic Test in Mamals Chapter 9. En: “Mitageneticy resting a practicas approach” Venitt S. y Parry JM (Eds) OIRL PRESS. Oxford Washington D.C.

Altamirano LozanoM; Alvarez-Barrera L. y Roldan-Reyes E. 1993. Citogenetic and teratogenetic effects of vanadium pentoxide on mice. Medical Science Research 21:711-7113.

Roldan Reyes E. 1992. “Efecto mutagenetico y teratogenetico del pentaoxidoe de Vanadio” Fes Zaragoza UNAM. México. Tesis de Maestria