IDENTIFICACION DE ENLACES PEPTÍDICOS.

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La reacción entre un aminoácido y la ninhidrina es la siguiente:

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Procedimiento:

- Tome y rotule tres tubos de ensayo diferentes (1, 2 y 3).

- En cada uno de ellos deposite 2 mL de solución de ovoalbúmina 10%, solución de glicina 0.1 M y agua destilada, respectivamente.

- Luego se añada 5 gotas del reactivo de ninhidrina y se coloque los tubos en un baño de María a 100° C por 1 minuto.

- Deje enfriar.

Anote los resultados en la tabla No. 1 al final del formato de práctica.

2. Reacción de Biuret

El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por la condensación de dos moléculas de úrea con eliminación de amoníaco. Esta reacción está dada por aquellas sustancias cuyas moléculas contienen dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a través de un solo átomo de carbono o nitrógeno. El reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solución acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.

Esta última reacción provoca un cambio de coloración: violeta púrpura o violeta rosado. Debe señalarse que el color depende de la naturaleza de las proteínas; proteínas y péptidos dan un color rosado; la gelatina da un color azul.

Procedimiento:

- Tomar y rotular tres tubos de ensayo diferentes (1, 2 y 3).

- En cada uno de ellos deposite 2 mL de solución de ovoalbúmina 10%, Leche y orina, respectivamente.

- Luego añada 2 mL del reactivo de Biuret.

Anote los resultados en la tabla No. 2 al final del formato de práctica.

4. Reacción Xantoproteica

Esta prueba caracteriza a los aminoácidos aromáticos. Esta reacción se debe la presencia de un grupo fenilo en la molécula proteica. Los complejos de la molécula proteica que son de importancia en esta reacción son la tirosina y el triptófano. La fenilalanina no reacciona en las condiciones que se realiza en el laboratorio.

Para esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formación de ácido picrámico o trinitrofenol).

Procedimiento:

- Tome y rotule tres tubos de ensayo diferentes (1, 2 y 3).

- En cada uno de ellos deposite 2 mL de solución de ovoalbúmina 10%, solución de glicina 0.1 M y agua destilada, respectivamente.

- Añada 1mL de HNO3 concentrado. ¡CUIDADO AL AGREGAR EL ÁCIDO!

- Coloque los tubos en un baño de María a 100° C por 1 minuto.

- Observe los cambios. Deje enfriar.

- Añada cuidadosamente solución de hidróxido de sodio concentrado en exceso. Observe la coloración nuevamente.

Anote los resultados en la tabla No. 1 al final del formato de práctica.

TABLA 1: Resultados de Pruebas para Identificación de Enlaces Peptídicos (Ninhidrina y Xantopreoteica)

TUBOS

REACCION

Ninhidrina

Xantoproteica

Ovoalbúmina al 10%

Glicina o.1M

Agua destilada

TABLA 2: Resultados de Biuret

Muestra

Cambios observados

Clara de Huevo

Leche

Orina

Bibliografía

- Quiñónes, Z. 2004. Identificación de Carbohidratos y Proteínas. Práctica de Laboratorio. Departamento de Ciencias Fisiológicas. Departamento de Medicina. PUCMM. República Dominicana.

- Ruiz-Robleto, J. 2008. Identificación del Enlace Peptídico por Reacciones Químicas. Práctica de Laboratorio. Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud, UMG. Guatemala.

- Identificación de Carbohidratos y Proteínas. 2008. Práctica de Laboratorio. Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud, UMG. Guatemala.