INFORME DE LABORATORIO Nº 2. APLICACION DE LAS TECNICAS DE IGARASHI, ENFRENTAMIENTO DUAL Y GAUZE PARA INTERACCIONES MICROBIANAS

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- Tabla 3. Técnica de enfrentamiento de Gauze

Análisis macrobiano

Análisis microbiano

Imagen 6. Enfrentamiento Gauze en Agar Avena

Tomada por. Sánchez María (2016)

Bacteria 1.

- Crecimiento total en la caja.

- Color: blanco, amarillo.

- Textura: cremoso

- Crecimiento por colonias.

Bacterias 2.

- Pigmento Beige

- Elevación plana

- Textura: cremoso

- Crecimiento parcial de la caja

Bacteria 1.

- Son cosos, Gram positivos

Bacteria 2.

- Bacilos, Gram positivos

Imagen 7. Enfrentamiento Gauze en Agar Nutritivo

Tomada por. Sánchez María (2016)

Bacteria 1.

- Crecimiento total en la caja.

- Color: blanco, amarillo.

- Textura: cremoso

- Crecimiento por colonias.

Bacteria 1.

- Son cocos, Gram positivos

DISCUSIÓN

Durante los resultados obtenidos de la técnica del enfrentamiento dual, fue posible observar que la inhibición del crecimiento del antagonista se encontró distante del patógeno, posiblemente a través de la antibiosis, mecanismo característico para estas especies de biocontroladores. La forma en que Trichoderma sp probablemente inhibe el crecimiento radial, aun estando a distancia del patógeno, esta mediada por diversos mecanismos, destacándose la producción de compuestos inhibitorios al medio; antibiosis por producción de metabolitos volátiles y no volátiles. (18) (19). Por esta razón, resulta más efectivo utilizar un antagonista que crezca primero que el patógeno y que además comience la inhibición de forma temprana.

Los aislamientos de Trichoderma sp utilizados presentaron un modo de acción favorable por competencia de nutrientes y espacio, ya que crecen rápidamente, superando el crecimiento de Fusarium oxysporum, impidiendo el desarrollo normal e inhibiendo en más del 50% el desarrollo de este, esto es posible detallarlo en el valor correspondido al PIM (Porcentaje de Inhibición Micelial) y además se pudo entender que cumplía una interacción de amensalismo. (16) (20).

En las técnicas de Gauze en Agar Avena, se sembró masivamente (organismo controlador) actinobacteria por todo el medio de cultivo y se observó que este microorganismo creció de manera espontánea.

Lo más interesante es ver que durante esta técnica y en el Agar Nutritivo, actinobacteria., pasó a ser el microorganismo inhibidor junto con E.coli . En esta prueba se usó actinobacteria., como organismo controlador y, así mismo, se realizó su siembra masiva en todo el Agar. Es bueno saber, que la actinobacteria., es una bacteria patógena y después de haber realizado y completado hasta su finalización la técnica, no presentó ningún cambio en cuanto a crecimiento, es decir, la caja petri con Agar Nutritivo permaneció estable durante antes y después de la incubación, y los microorganismos no presentaron cambios a nivel macroscópico. Se podría deducir de esto, que la presencia de actinobacteria es fundamental como agente inhibidor vs. Otros organismos. (15).

En la técnica de Igarashi que se desarrolló en el medio de cultivo Agar PDA, se observó que el organismo controlador empleado Trichoderma sp tuvo un excelente resultado, ya que Trichoderma sp tiene excelentes propiedades para el control biológico, siendo especialmente efectiva contra Rhizoctonia, Fusarium y Pythium. A su vez, es un excelente estimulador del crecimiento radicular (20).

Se observó un crecimiento alrededor de la cuadricula realizada de 3x3cm donde en su centro se había sembrado el patógeno (Fusarium oxysporum) y esto hace énfasis a las propiedades del organismo controlador que se usó. El Agar PDA puede ser suplementado con antibióticos o ácidos para inhibir el crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado para realizar el recuento colonial. También puede ser utilizado para promover el crecimiento de hongos y levaduras de importancia clínica. Es un medio muy usado que sirve para aislar todo tipo de hongos (18).

Debido a estas razones, juega un papel muy importante para el control biológico del organismo patógeno en cuanto a su propagación de enfermedad (viéndolo en un nivel más macro) o, en cuanto a su crecimiento. Aunque si hubo un crecimiento radial de Fusarium oxysporum nunca sobrepasó la cuadrícula, siendo así, que el organismo controlador Trichoderma sp no permitió la propagación del hongo y se relacionó con la interacción microbiana de antibiosis, y la técnica fue satisfactoria para lo que se quería analizar. (20).

CONCLUSIONES

Las técnicas de crecimiento dual e Igarashi se relacionan prácticamente porque es un tipo de interacción negativa en la cual el Amensalismo y Antibiosis fundamentaron en el análisis de los microorganismos que estaban sembrados en los Agares. Estas técnicas son bastante interesantes de analizar porque se puede entender cómo es la interacción microbiana dependiendo de sus propiedades, de su medio, y cómo es esa dinámica que generan con otros organismos (ya sean controladores o patógenos). Cabe resaltar que para un Ingeniero Ambiental le es útil este tipo de conocimientos porque se puede entender desde un punto de vista integral, cómo los sistemas que están en constante interacción son afectados o, a su vez, son favorecidos por las condiciones en que se encuentran para su crecimiento y desarrollo.

Para que sea más fácil que se genere inhibición en un medio de cultivo, es importante que el microorganismo antagonista crezca antes que el microorganismo patógeno, es decir que empiece a generar aquellas sustancias que inhiben el crecimiento de los microorganismos patógenos para así servir como un controlador biológico y ser más eficiente en