PRACTICA 6: Cuantificación de ADN por espectrofotometría
Enviado por Ensa05 • 21 de Abril de 2018 • 876 Palabras (4 Páginas) • 663 Visitas
...
DISCUSIÓN:
El espectrofotómetro se fundamenta en la transmisión de la luz a través de una solución.
Cada molécula absorbe la energía a una longitud de onda específica, a partir de la cual es posible extrapolar la concentración de un soluto en una solución. La ley de Lambert-Beer establece que existe una relación lineal entre la absorbancia A (también denominada densidad óptica, DO) y la concentración de la macromolécula, conforme a la ecuación siguiente:
A = DO = εlc
Donde ε es el coeficiente de extinción molar, c es la concentración y l es el paso de luz de la cubeta.
Las proteínas y los ácidos nucleicos absorben la luz ultravioleta, a longitudes de onda comprendidas entre los 210 y los 300 nm. La absorbancia máxima de las soluciones de ADN y ARN corresponde a 260 nm y la de las soluciones de proteínas, a 280 nm.
Dado que las soluciones de ADN y ARN absorben parcialmente la luz a 280 nm y las que contienen proteínas hacen lo propio a 260 nm, el cociente de los valores obtenidos a 260 nm y a 280 nm (A260/A280) proporciona una estimación del grado de pureza de los ácidos nucleicos.
Los cocientes A260/A280 respectivos del ADN y el ARN puros son aproximadamente de 1,8 y 2,0. Con un paso de luz de 10 mm y una longitud de onda de 260 nm, una absorbancia A = 1 corresponde aproximadamente a:
50 µg/ml de ADN bicatenario o 50 ng/µl de ADN.
En este caso se obtuvo 0.96 de absorbancia, y haciendo la relación correspondiente se obtuvieron 48 ng/µl de ADN contenido en la muestra.
BIBLIOGRAFÍA:
Jiménez-Vega, F. (2011). Manual de Practicas de Biología Molecular. Universidad Autónoma de Ciudad Juárez, Instituto de Ciencias Biomédicas. http://sirio.uacj.mx/ICB/cqb/licenciaturaenbiolog%C3%ADa/Documents/Manuales/avanzado/BIOLOGIA%20MOLECULAR.pdf
Arenas-Sosa, I. y López-Sánchez, J. L. (2004). Espectrofotometría de Absorción. Instituto de Biotecnología, Universidad Nacional Autónoma de México, curso de Maestría en Ciencias Biomédicas. http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/espectrometria_de_absorcion.pdf
Zarate-Segura, P. B., Jiménez-Sierra, C. A., Badillo-Corona, J. A., Garibay-Orijel, C. y Oliver-Salvador, M. C. (2009). Manual del Laboratorio de Biotecnología Molecular. Instituto Politécnico Nacional, Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología, Departamento de Bioprocesos. http://www.biblioteca.upibi.ipn.mx/Archivos/Material%20Didactico/Manual%20del%20Laboratorio%20de%20Biotecnologia%20Molecular.pdf
Díaz, N. A., Bárcena-Ruiz, A., Fernández-Reyes, E., Galván-Cejudo, A., Jorrin-Novo, J., Peinado-Peinado, J., Melendez-Valdes, F. T y Túnez-Fiñana, I. Espectrofotometría: Espectros de Absorción y Cuantificación colorimétrica de Biomoléculas. Universidad de Córdoba, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA.pdf
Plummer, D. T. (1981). Introducción a la Bioquímica Práctica. En Capitulo 4: Colorimetría y Espectrofotometría. http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp04.pdf
De Robertis EDP, De Robertis EMF. Biología celular y molecular. Un décimo edición. Editorial el Ateneo. Argentina, 1986.
...