PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA VIRUS DE INMUDIFICENCIA HUMANA (HIV) EN BANCO DE SANGRE

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Figura 1 Evolución de las pruebas de diagnóstico para HIV

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Por otra parte, los problemas que no se habían resuelto para la confirmación de ELISAs aún de tercera generación, siguen vigentes.

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El cribaje de donantes para estas pruebas de cuarta y tercera generación se determina en esta figura a continuación

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MÉTODOS DIRECTOS

Están basados en la detección del virus o alguno de sus componentes. Incluyen Técnicas moleculares, Aunque el diagnóstico de la infección por el VIH debe establecerse mediante la detección de anticuerpos específicos del virus, puede ser conveniente la utilización de técnicas moleculares basadas en el reconocimiento de fragmentos del genoma del virus. Estas situaciones especiales se producen en casos de hipogammaglobulinemia, infección perinatal, infección silente o infección por variantes del virus que pueden escapar a la detección con las técnicas habituales serológicas, como son el VIH-2 y el subtipo O del VIH-1. (Castillo, 2010)

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es el método de elección para el diagnóstico molecular de la infección por el VIH. Puede aplicarse directamente a la detección de ADN provírico a partir de células del paciente, o bien mediante una reacción de retrotranscripción previa (RT-PCR), realizada habitualmente en plasma, cuando la diana que se pretende localizar son las partículas de ARN vírico. Su utilización es imprescindible para el diagnóstico de VIH en los niños recién nacidos de madres seropositivas y en los pacientes con patrones serológicos atípicos.1 La conveniencia de utilizar técnicas moleculares en el screening de donantes es discutida, aunque es indudable que reduce aún más el periodo ventana previo a la seroconversión, de forma que podría diagnosticarse a un paciente infectado tan solo una semana después de su contacto con el virus. Con una aplicación diagnóstica enfocada a bancos de sangre se ha desarrollado recientemente un método basado en amplificación mediada por transcripción (TMA) que detecta de forma simultánea desde 100 copias/ml de VIH-1 y virus de la hepatitis C, con una sensibilidad y especificidad >99,5%.1

Para obtener los resultados más fiables y reproducibles las muestras de sangre deben ser recogidas preferentemente en tubos con EDTA mejor que en citrato y no deben utilizarse tubos con heparina, que es un potente inhibidor de la PCR.1 La separación del plasma debe realizarse antes de 6 horas, si bien pueden utilizarse tubos separadores de plasma (CPT, PPT) que, una vez centrifugados, mantienen estable el ARN vírico al menos 30 horas a 4ºC. 2

La cuantificación de la viremia plasmática, más conocida como carga viral, es una prueba esencial aplicada al seguimiento de los pacientes más que al diagnóstico de los mismos, ya que al medir el nivel de replicación del virus permite evaluar la eficacia del tratamiento antirretroviral, constituyendo un marcador predictivo de la infección de inestimable ayuda. Existen diversas técnicas con rendimiento similares, pero fundamentos diversos, de modo que encontramos técnicas de amplificación de secuencia, como la anteriormente referida PCR y el NASBA, y técnicas de amplificación de señal (bDNA). El nivel inferior de detección es de 50 copias utilizando procedimientos ultrasensibles. 2

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PRUEBAS CONFIRMATORIAS PARA LA INFECCIÓN POR EL VIH

Como su nombre lo indica, estas pruebas están orientadas a confirmar la presencia de la infección por el VIH en un paciente con una prueba presuntiva doblemente reactiva, por lo que tienen una alta especificidad. Se basan en la detección de anticuerpos contra el virus o sus componentes. Entre los principales tenemos. 2

Western Blot

El Western Blot es la técnica más ampliamente utilizada y consiste en que las proteínas constitutivas del virus se separan por electroforesis y, luego, se transfieren a un papel de nitrocelulosa. Estas proteínas fijadas son expuestas al suero del paciente, en el cual los anticuerpos específicos se unen a las proteínas presentes dando un patrón de bandas, cuya interpretación depende del criterio que se adopte en el laboratorio. 3

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El resultado de la prueba de Western Blot se informa como negativo cuando hay ausencia total de bandas; como indeterminado puede deberse a un período inicial de seroconversión o a un falso positivo, sobre todo cuando se trata de una sola banda, usualmente la p24. el tipo de hallazgo puede estar en relación con lupus eritematoso sistémico, tiroiditis de Hashimoto, linfoma no Hodgkin, histiocitosis, muestra con elevada bilirrubina, hemólisis, factor reumatoideo, gammapatía policlonal, hemodiálisis, anticuerpos HLA y otras enfermedades infecciosas, incluso la infección por HTLV-1. 3

Una prueba de Western Blot para VIH 1 sugestiva de infección por el VIH 2, debe ser confirmarse por un Western Blot específico para VIH 2 o por pruebas que involucren proteínas recombinantes específicas. En algunos casos es necesario hacer PCR para ambos virus. 3

Inmunofluorescencia

La Inmunofluorescencia indirecta se ha utilizado ampliamente como prueba confirmatoria para la infección por el VIH-1 y lo siguen haciendo laboratorios con amplia experiencia con la prueba. Su desempeño es bueno, pero requiere de personal debidamente entrenado para su lectura y de microscopio de fluorescencia. 3

Interpretación de resultados:

En las técnicas ELISAs, las muestras con valores de absorbancia inferiores al valor de la línea de corte (CUT OFF) se consideran negativas o no reactivas para anticuerpos anti-VIH. Las muestras con valores de absorbancia superiores o iguales al valor de la línea de corte se consideran inicialmente reactivas y deberán repetirse. Si la muestra vuelve a tener valores de absorbancia superior o igual a la línea de corte, deberá ser confirmada con alguna técnica suplementaria. 4

De acuerdo al algoritmo del Laboratorio de Referencia de VIH, una muestra es considerada negativa cuando resulta no reactiva por los dos ensayos de ELISA preestablecidos; o bien, no se detecta reactividad contra ninguna proteína viral mediante métodos suplementarios. Las muestras negativas no poseen anticuerpos específicos