PRÁCTICA No. 5 ELABORACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

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Actividades

1.- Determinar el volumen del medio de cultivo requerido.

2.- Calcule y pese los gramos necesarios del agar en un matraz Erlenmeyer.

3.- Adicione el volumen exacto de agua destilada a pH 7 usando una probeta para medirla y colóquele una torunda de algodón con gasa al matraz.

4.- Mezcle el medio de cultivo agitándolo muy bien, pero evitando que el medio alcance el tapón del matraz.

5.- Pase a esterilizar en autoclave u olla de presión los agares en los matraces, siguiendo las indicaciones ya sugeridas en la práctica No. 5.

6.- Mezcle muy bien y enfríe los agares hasta que alcancen una temperatura de 45°C. (Que se soporte al tocar las paredes del matraz). Si es necesario enfríelos al chorro de agua de la llave.

7.- En la superficie de la mesa limpia y desinfectada, frente a la flama del mechero, retire la cubierta a las placas estériles y tome una a la ves abriéndola correctamente cerca de la flama del mechero, vierta suficiente agar a que se cubra bien el fondo de la base de la caja de Petri. (Aproximadamente 15- 18ml).

8.- Cierre la placa y colóquela sobre la mesa limpia y desinfectada, déjela en reposo sin movimiento hasta que solidifique por completo el agar.

9.- Invierta las placas con los agares y colóquelas en una incubadora a 37°C por 24 horas.

10.- Después de las 24 horas revise los agares en las placas, no debe observarse desarrollo de colonias microbianas (contaminantes).

11.- Deposite las placas con los agares que pasaron la prueba de esterilidad, en un lugar seguro, limpio, desinfectado, libre de polvo y sin humedad, puede ser a temperatura ambiente o en refrigeración, donde pueden almacenarse por semanas o meses.

Resultados y discusiones

Camacho, A. (2009). Menciona: que se debe distribuir las cajas estériles en la mesa de trabajo de manera que la inoculación y la adición de medio de cultivo se puedan realizar cómoda y libremente. Marcar las bases de las cajas con los datos pertinentes. Agregar de 18 a 20 mL del medio fundido y mantenido a 45 °C. Para homogenizar, mezclar mediante 6 movimientos de derecha a izquierda, 6 en el sentido de las manecillas del reloj, 6 en sentido contrario y 6 de atrás a adelante, sobre una superficie lisa y horizontal; cuidar que el medio no moje la cubierta de las cajas. Dejar solidificar. Incubar las cajas en posición invertida durante el tiempo y a la temperatura que se requiera, según el tipo de alimento y microorganismo de que se trate.

Conclusiones

Se realizó correctamente el vertido de agar nutritivo a placas Petri estériles a una temperatura adecuada, evitando los riesgos de contaminación, desarrollo microbiano. Además se realizó la prueba de esterilidad a las placas incubando por 24 horas para comprobar que no haya crecimiento.

Literatura consultada

Camacho, A., M.Giles, A.Ortegón, M.Palao, B.Serrano y O.Velázquez. 2009. Técnicas para el Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed. Facultad de Química, UNAM. México. Recuperado de:

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Cuenta-en-placa_6527.pdf

PRÁCTICA No. 7 CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO: PRUEBA DE ESTERILIDAD Y PROMOCIÓN DEL CRECIMIENTO

Fundamento:

Los medios de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiología, por lo tanto es necesario contar con un control de calidad de los mismos, desde su fabricación, preparación, conservación hasta su uso, que nos asegure la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de nuestros resultados. En primera instancia los medios de cultivo que se manejen en el laboratorio, deben cumplir con los requisitos mínimos (especificaciones de calidad) que marca la NOM-065-SSA11993. El laboratorio debe registrar las fechas de recepción, apertura del envase y caducidad de cada uno de los medios. Pero además los medios de cultivo ya preparados deben ser validados antes de su utilización, mediante la verificación de pruebas de esterilidad, de recuperación y propagación de microorganismos y también con pruebas fisicoquímicas que les correspondan.

Método:

1.- Revise el color y la solidez de los agares en placas y tubos.

2.- Revise el color y pH de los medios líquidos (use solo un tubo para determinar el pH).

3.- Revise el color y grado de solidez del agar blando (medio semisólido).

4.- Coloque una placa y un tubo de cada uno de los diferentes medios de cultivo sin inocularlos, en una incubadora a 37°C por 24 horas, para la prueba de esterilidad.

5.- Inocule una placa de los medios correspondientes, por estría simple, tomando una gota del cultivo microbiano correspondiente con el asa bacteriológica.( trazando líneas horizontales sobre el agar, evitando romperlo).

6.- También inocule un tubo de cada caldo, tome una gota del cultivo que corresponda con el asa bacteriológica y deposítela en el mismo.

7.- Lleve a incubar todos los medios inoculados a 37°C por 24 horas.

8.-Después del período de incubación revise los medios de cultivo, no debe observarse desarrollo de colonias microbianas o turbidez en los no inoculados, pero los que si se inocularon deben presentar crecimiento con características que correspondan al microorganismo inoculado.

9.- Reporte si los medios de cultivo cumplieron con la prueba de esterilidad.

10.- Reporte en una tabla los resultados que se obtuvieron para cada medio de cultivo que se revisó.

11.- Revise si los resultados corresponden a cada uno de los medios.

12.- Analice y discuta sus resultados

13.- Concluya en base a los objetivos planteados como competencias y los resultados obtenidos.

Resultados y discusiones:

Salazar Gonzales M. (2012). Menciona que el cultivo