¿Qué es y cual es el objetivo del fraccionamiento celular, la homogenización y la centrifugación diferencial?

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Un particular componente puede terminar en el sobrenadante o en el pellet, o podría estar distribuido en ambas fracciones, dependiendo de su tamaño y/o de las condiciones de centrifugación. El pellet es una mezcla de todos los componentes sedimentados y esta contaminado con cualquier partícula no sedimentada que estuviera en el fondo de el tubo. Las dos fracciones son recuperadas por decantación de la solución sobrenadante del pellet. El sobrenadante puede ser recentrifugado a altas velocidades para obtener una mayor purificación con la formación de nuevo pellet y sobrenadante. El pellet puede ser resuspendido en un pequeño volumen y recentrifugado dependiendo de lo que se desee separar.

- ¿qué son las rpm y las “g”? buscar como se convierte de rmp a g

RMP

la cantidad de vueltas que un cuerpo giratorio completa alrededor de su eje cada sesenta segundos. Esta es la fórmula de conversión de la velocidad de centrifugación de r.p.m. (revoluciones por minuto) a g (es la fuerza centrífuga relativa, expresada en g).

Para el cálculo se debemos conocer el radio del rotor en centímetros, por lo que es imprescindible calcular de nuevo esta relación para cada centrífuga.

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- ¿Qué soluciones pueden utilizarse en la homogenización química, cuáles son las ventajas y las desventajas de cada uno de ellos?

Se utilizan sustancias que pueden dañar directamente a la pared celular , como:

Solventes organicos:

Ventajas: disuelve lípidos que forman parte de la pared celular, y la desestabilizan, además es barato

Desventajas: causa un estrés moderado en la célula.

Detergentes:

Ventjas: disuelve a la membrana celular solubilizándola, además proporciona un estrés suave en la célula.

Desventajas: moderadamente caro, y disuelve toas las membranas plasmáticas exponiendo sus componentes.

Álcalis.

Ventajas: solubilizan de la membrana por saponificación de los lípidos que la componen, además de ser barato

Desventaja. No es muy recomendable ya que causa un estrés muy fuerte en la celula.

- ¿En la centrifugación diferencial se obtiene fracciones puras?

Aquí el homogenizado es centrifugado repetidas veces a altas velocidades sedimentando progresivamente en pequeñas partículas. La primera centrifugación es a 600 g por 10 minutos, el cual sedimenta la fracción nuclear. Este pellet contiene el núcleo celular intacto y tejido la próxima separación es el sobrenadante post nuclear o partículas suspendidas en el liquido sobre el pellet nuclear, el cual es transferido a otro tubo de centrífuga y se centrifuga a 10,000 g por 30 minutos en una centrifuga rerigerada. El material sedimentado se conoce como fracción mitocondrial, este contien mitocondrias y micro cuerpos la centrifugación diferencial se basa en la existencia de diferentes partículas en la suspensión que difieren en su densidad que la del medio. Si se centrifuga en condiciones suaves, sedimentaran las partículas más densas presentes y asi sucesivamente . por lo tanto no se obtienen fracciones puras, ya que en el pellet han quedado los organelos intactos mientras que en el sobrenadante esta una mezcla de fracciones de organelos.

- Qué otras técnicas adicionales pueden utilizarse para mejorar la