AREA 5 QUÍMICO BIOLÓGICAS “BRUCELOSIS EN EL GANADO”

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° Los tubos para la extracción deben estar limpios, secos y bien tapados. Además, deben estar adecuadamente rotulados (número de identificación del animal muestreado) empleando un marcador indeleble o cinta de enmascarar.

° Una vez extraída la muestra (un volumen de 4 ml.), la sangre se dejará coagular hasta que se produzca la exudación del suero durante 6 a 8 hrs.

° Ésta se conservará en heladera (no congelar) hasta su envío al laboratorio en un plazo no mayor a las 18 h.

Pruebas serológicas

La prueba del BPA (buffered plate antigen) es una prueba de aglutinación rápida en placa cuyo antígeno tiene pH de 3,65-3,8. En esas condiciones, son esencialmente detectados los Ac de clase IgG1. Esta prueba se emplea como tamiz dada su alta sensibilidad, bajo costo operativo y sencillez (Hernández et al, 2000).

Dentro de las pruebas complementarias, la prueba de seroaglutinación lenta en tubo (SAT) es una prueba semicuantitativa, que se desarrolla a pH neutro, muy sensible contra los Ac de la clase IgM detectando también IgG2. Su especificidad y sensibilidad son relativamente bajas. La prueba de Fijación de Complemento (FC) aparece como la menos afectada por los Ac residuales post-vacunación. En este sentido puede considerarse como la más específica, y sigue siendo "la prueba" de referencia en brucelosis a nivel internacional y por otro lado es la prueba confirmatoria en nuestro país. En la actualidad hay un gran número de pruebas serológicas disponibles para el diagnóstico de la brucelosis y se siguen agregando nuevas técnicas a medida que avanza la investigación. En los últimos años se han validado las pruebas inmunoenzimáticas que emplean LPS como antígeno (ELISA indirecto y ELISA competitivo) y la polarización fluorescente que poseen mayor sensibilidad y especificidad en relación a las pruebas convencionales antes mencionadas. Estas técnicas han sido incorporadas desde el año 2006 al Plan Nacional de Brucelosis por el SENASA. (Morley, 2002)

Toma y remisión de muestras para bacteriología

Las muestras a remitir deben ser enfriadas inmediatamente luego de su extracción, y en caso de enviarse a sitios alejados (12 h. o más de viaje) deben congelarse. Éstas deben transportarse en recipientes impermeables en el que irá la muestra envuelta, rodeado de un material absorbente y todo acondicionado en un recipiente sólido apto para su transporte. Las principales muestras para cultivo y aislamiento a partir de animales vivos son: leche, flujo vaginal, membranas fetales, placenta, líquido de higroma y semen. En el caso de fetos abortados, las muestras de elección son el contenido abomasal, pulmón y bazo. En la necropsia de las hembras se tomarán muestras de linfonódulos craneales, bazo, hígado, útero, mamas, linfonódulos retromamarios, testículos, epidídimos, vesículas seminales. Una vez en el laboratorio se realizará la observación de los frotis o improntas por coloración y la siembra directa en medios de cultivo sólidos adecuados para el crecimiento de Brucella.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Esta técnica de biología molecular es una excelente opción para determinar la especie de brucela (previamente aislada mediante alguna prueba bacteriológica) y diferenciarla entre una cepa vacunal y una de campo. A través de la extracción de ADN de muestras de tejidos (placenta, carúnculas, bazo, epidídimo, etc.), líquido abomasal fetal y secreciones (exudado vaginal, leche, semen) es posible identificar la presencia de ADN específico de la bacteria.

Tratamiento

A pesar de los extremos estudios realizados en los últimos 15 años, la terapia antibiótica óptima para el tratamiento de brucelosis está aún en discusión. Debido a que la localización de la Brucella es intracelular, para su tratamiento se requiere la asociación de más de un antimicrobiano, por varias semanas. La OMS recomienda, para brucelosis aguda en adultos, Rifampicina 600 a 900 mg y Doxaciclina 200 mg por un mínimo de 6 semanas. Las complicaciones de la infección, tales como meningoencefalitis o endocarditis requieren de una terapia con Rifampicina, tetraciclina y un amino glucósido. La Rifampicina ha sido recomendada como tratamiento de elección para la infección sin complicación en los niños (Hernandez et al, 2000).

Prevención

° Vacunando todas las terneras entre los 3 y 8 meses de edad

° Haciendo exámenes periódicos, para conocer el estado sanitario de los animales.

° Separando, identificando y llevando a las planta de sacrifico los animales positivos, para evitar el riesgo de infectar a los sanos.

° Conservando la vacuna en refrigeración (entre 3 y 7 grados centígrados) y por ningún motivo congelarla.

Kit de diagnostico

BPA. Antígeno brucélico ácido amortiguado para prueba rápida en placa.

Es una suspensión de Brucella abortus 1119-3 al 11% en solución salina fenolada (0,5%) inactivada por calor y amortiguada con ácido láctico (pH= 3,7 + 0,3). frasco de 10 ml proveyendo 300 dosis de antígeno de 0,03 ml cada una.

Método:

1- Retirar los sueros y el antígeno de la heladera con anticipación para que alcancen la temperatura del laboratorio 22 + 1º C. 2- Colocar 0,08 ml del primer suero en el primer cuadro de la placa de vidrio, luego el segundo suero en el segundo cuadro y así sucesivamente. Con la pipeta de Bang, operar tocando la placa y manteniendo un ángulo de 45º. 3- Mezclar el antígeno por agitación suave e inversiones repetidas del frasco bien cerrado, hasta total homogeneización (unos 5 minutos inicialmente). 4- Con el gotero o pipeta/dispensador automático colocar un volumen de 0,03 ml sobre cada gota del suero. 5- Mezclar cada gota de suero y antígeno con unos 10 a 12 movimientos circulares, extendiéndola sobre un diámetro de 3 cm. El uso del peine mezclador agiliza la tarea. 6- Efectuar a mano 3 rotaciones de la placa en 3 ocasiones: la primera luego del mezclado, la segunda a los 4 minutos y la tercera a los 8 minutos de la primera. En este momento realizar la lectura de la prueba, encendiendo la luz del aglutinoscopio. No deben considerarse válidos los resultados de lecturas realizadas antes ni después de los 8 minutos. 7- Interpretación: Si los sueros no aglutinan al antígeno