Aminoacidos y proteinas PRUEBA DE BIURET

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Gráfica 4. Sustancias con el reactivo XANTOPROTEICO antes de someterlos a baño maría.

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Gráfica 5. Sustancias con el reactivo XANTOPROTEICO después de someterlos a baño maría.

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Gráfica 6. Sustancias con el reactivo XANTOPROTEICO después de someterlos a baño

maría.

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Gráfica 7. Comportamiento de la histidina, alanina y agua, con el reactivo XANTOPROTEICO, dando resultados negativos para este.

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Grafica 8. Comportamieneto de la urea con el reactivo XANTOPROTEICO, observando un resultado negativo.

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Grafica 9. Comportamiento de la clara de huevo con el reactivo de NINHIDRINA.

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Grafica 10. Comportamiento de la leche de soya con el reactivo de NINHIDRINA.

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Grafica 11. Comportamiento del gluten con reactivo de BIURET

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Grafica 13. Comportamiento de la histidina con reactivo de BIURET[d].

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Gráfica 14. Comportamiento de la alanina con reactivo de BIURET.

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PRUEBA DE BIURET

Es[f] un método general para la determinación de proteínas o péptidos, se basa en la reacción de sulfato de cobre con compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos, el producto es un complejo color violeta cuya intensidad de color depende de la cantidad de enlaces peptídicos presentes. (2).

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En el primer caso de clara de huevo, gluten y proteína de soya[g] el resultado fue positivo debido a la presencia de enlaces peptídicos, están compuestas por muchas proteínas, que los componen a su vez aminoácidos a través de enlaces peptídicos que es la unión de un grupo amino de un aminoácido y el grupo carboxilo de otro. En la clara de huevo encontramos proteínas como ovoalbúmina ovotrasferrine, ovomucoide lisozima gluboina (ovohimnhibidor ovoglucoproteina ovomacioglubina avidina, la cuales están compuestas de uniones de aminoácidos; la leche de soya es una mezcla de proteínas de globulinas y albuminas y para la harina de trigo se encuentra que las proteínas se descompone albumina globulina y gliadina; debido a la gran presencia de proteínas los resultados fueron positivos.

En el caso de la urea el resultado fue negativo debido a que la urea es el producto resultante de la degradación de las proteínas llevada a cabo por el hígado, ya no es como tal una proteína.(3)

Para el resto de compuestos los resultados fueron negativos lo cual se evidencio en la coloración azul resultante, esto es debido a que son aminoácidos libres y demás esta prueba se fundamenta en detectar enlaces péptidos o proteínas.

PRUEBA XANTOPROTEICA

La reacción es debida a la nitración del anillo bencénico con el ácido nítrico concentrado, para dar productos de color amarillo, que se tornan anaranjados debido a la formación de sales.

Las muestras de triptófano y tirosina al reaccionar con HNO3 y la solución de NaOH al 40%, presentan una coloración naranja debido a que en su estructura se encuentran presentes anillos bencénicos; en el caso de la fenilalanina es más difícil de nitrar, este tiene un anillo aromático pero no está activado, por lo tanto el proceso de nitración no se da fácilmente y se requeriría de ácido sulfúrico como catalizador. (4)

Para las pruebas con clara de huevo, gluten y proteína de soya los resultados fueron positivos, ya que las proteínas que constituyen dichas muestras presentan aminoácidos que en su estructura tienen anillos bencénicos o grupos aromáticos.

Las demás pruebas con agua, urea, alanina, histidina y glicina dieron negativas debido a que en su estructura no poseen anillos bencénicos, por lo tanto no van a producir la nitración del anillo bencénico.

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PRUEBA NINHIDRINA

La ninhidrina es positiva para todos los grupos libres, ya sea en aminoácidos libre que posee un grupo carboxilo libre (COOH) adyacente al grupo amino, la reacción adicional causa la desacarboxilaicon del iminoacido de dióxido de carbono y al próximo aldehído inferior, amoniaco y la reacción de color. (5)

Se sabe que todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre, reaccionaran con la ninhidrina, Debido a que las proteínas y los aminoácidos, poseen esta característica, la reacción sirve para identificarlos.

De este modo se encontró que el reactivo de ninhidrina reacciono con el grupo alfa-amino libre de los aminoácidos presentes en la clara de huevo, gluten de trigo y proteína de soya, produciendo complejos purpura-yodado en diferentes tonalidades y profundidades.

Las muestras utilizadas se encontraban un grupo de alfa-aminoácidos, los cuales deben arrojar resultados positivos ya que esta prueba se utiliza para identificar y cuantificar los aminoácidos. En el caso de la urea el resultado fue negativo porque este no es un aminoácido si no como se mencionaba anteriormente es un resultante de la degradación de las proteínas.

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Preguntas complementarias[h]

- dibuje las moléculas de los 20 aminoácidos más importantes y ponga un asterisco en el nombre de las 9 moléculas de aminoácidos esenciales. (6)

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- ¿cuál de las pruebas realizadas en el laboratorio identifica proteínas (grupos peptídicos)? ¿Cuál determinara la presencia de aminoácidos libres? ¿cuál diferencia la tirosina del triptófano? (7)

La presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la reacción del Biuret, debido a que El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución