Las proteínas no son únicamente polipéptidos sino que tienen una secuencia de aminoácidos propia

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(No sé como poner esta tabla)

CALCULOS

(¡CUALES CALCULOS?)

DISCUSIÓN

*En el proceso de precipitación con salting-out, la concentración de iones aumenta progresivamente y estos interactúan con la molécula de agua que rodea a la proteína, permitiendo que las moléculas proteicas interacciones entre si y precipiten.

Cuando se le agrega poca cantidad de sal (sulfato de amonio) aumenta la solubilidad de las proteínas, pero al seguir adicionando la sal la solubilidad disminuye y se forma el precipitado, de ahí se siguió adicionando el sulfato de amonio, esta vez se aumento la concentración de la misma (sulfato de amonio solido) se sobresaturo la solución y se filtró, al hacer esto (si se lleva a cabo de forma correcta) el filtrado 2 tendría que darnos negativo con la prueba de biuret y el precipitado 1 y 2 así como el filtrado 1 darnos positivo, pues eso indica presencia de proteicas. En el filtrado dos la prueba es negativa porque al sobresaturar la solución con la sal las proteínas precipitan y en la solución acuosa (filtrado 2) no debería de haber existencia de estas.

[pic 3]

Imagen 1. Prueba de Biuret.

*Los iones H+ Y OH- del agua provocan efectos parecidos, pero además de afectar la envoltura acuosa de las proteínas también afecta la carga eléctrica de los grupos ácidos y básicos de las cadenas laterales de los aminoácidos. Esta alteración de la carga superficial de las proteínas elimina las interacciones electrostáticas que estabilizan la estructura terciaria y a menudo provoca su precipitación. La solubilidad de una proteína es mínima en su punto isoeléctrico, ya que su carga neta es cero y desaparece cualquier fuerza de repulsión electrostática que pudiera dificultar la formación de agregados.

En nuestro experimento al adicionar HCl y regulador de acetatos a la clara de huevo diluida se pudo observar que era insoluble, lo que nos dice que al modificar el pH y volverlo más ácido las proteínas precipitan y la solución se vuelve opalescente.

Cuando se adiciono el etanol también hubo una precipitación, esto ocurre porque el etanol posee una constante dieléctrica menor al del agua, lo cual ocasiono una mayor atracción entre las cargas opuestas produciendo conglomerados de moléculas que tienden a precipitar.

En cambio al adicionar NaOH y agua, se apreció una clara solubilidad en las mismas. Las bases aumentan la solubilidad, el agua desde luego no afecto.

*Metales pesados: los iones de algunos metales pesados, tales como el plomo (Pb) y el mercurio (Hg), precipitan a las proteínas y, por lo tanto inactivan las enzimas. Normalmente, las enzimas están en suspensión dentro del citoplasma o unidas a una biomembrana. Si los iones de un metal pesado se combinan con una enzima en suspensión, la molécula proteica precipita, perdiendo su eficacia como enzima.

Nosotros trabajamos con cloruro de mercurio, nitrato de plata, acetato de plomo, cloruro de sodio y agua, la precipitación se observó con la soluciones que tenían metales pesados tales como el Pb, Hg y Ag, con el cloruro de sodio y agua, no se observó precipitación. Esto nos dice que al formarse un complejo entre el aminoácido y los iones del metal pesado precipitan.

[pic 4]

Imagen 2. Precipitación por metales pesados.

*Para la determinación del punto isoeléctrico de la insulina se adiciono ácido acético y acetato de sodio en diferentes proporciones sabiendo que en el punto isoeléctrico la solubilidad de las proteínas es mínima, con lo cual se concluyó que en el sistema en el cual la proteína precipite se encuentra a un pH cercano del punto isoeléctrico.

CONCLUSIONES:

BIBLIOGRAFIA

- Rendina, George “Técnicas de Bioquímica Aplicada. Editorial Interamericana. 1ra Edición, México 1974.

- H. D, Durst “Química Organica Experimental” Editorial Reverte, Mexico 1985.