Curva de crecimiento de no filamentoso.

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Después de la incubación, cuente como colonias presuntivas de Clostridium sulfito reductor, las colonias negras con halo opaco de 2-4 mm. Multiplique el número de colonias por el inverso de la dilución para obtener el recuento presuntivo de Clostridium.

8. Confirmación Selección de colonias: seleccione 10 colonias representativas e inocule en medio tioglicolato regenerado (10 minutos en agua hirviendo) Incube por 4 horas en un baño de agua a 46oC o toda la noche a 35oC. Después de la incubación prepare una coloración de Gram y examine microscópicamente. Debe observar bacterias Gram positivas con o sin espora. Si observa contaminación con otras formas bacterianas, siembre nuevamente en agar TSC e incube anaeróbicamente, antes de proceder con las pruebas confirmatorias.

8. 1. Motilidad y nitritos. Tome una asada del caldo tioglicolato e inocule un tubo con medio nitritos-movilidad. Incube el medio inoculado a 35oC por 24 h. Revise la motilidad Clostridium sulfito reductor es inmóvil. Comprobar la presencia de nitritos en el medio nitritos añadiendo a cada tubo un mililitro de reactivo de Griess y observar el color que presenta, una prueba positiva dará color rojo, negativa incoloro; si no se observa cambio de color se adicionará una pequeña cantidad de polvo de zinc y si da coloración se informará como negativo, si no presenta cambio será positiva.

8.2. gelatina-lactosa Inocule un tubo del medio de cultivo lactosa gelatina con una asada de caldo tioglicolato. Incube el medio inoculado a 35oC por 24 – 48 h La fermentación de la lactosa se indica por la presencia de burbujas de gas y el cambio de color del medio de rojo a amarillo. La gelatina usualmente, se licua dentro de las 2448 horas. Nota 2. Tenga en cuenta que la gelatina es líquida a 35oC por lo que antes de hacer la lectura debe enfriarse, colocándoselos bajo un chorro de agua.

9. Expresión de resultados

Sobre el número total de colonias que crecieron después de las 48 horas de incubación y la proporción de las colonias confirmadas por las pruebas bioquímicas, hacer el cálculo utilizando como factor de corrección la relación:

RECUENTO DE Clostridium sulfito reductor PNT-AL-016 Basado en el manual de la USDA, Capítulo 13 y norma EN 13401

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Recuento total de colonias * Colonias positivas _________________________________________ = rto de Clostridium sulfito reductor Colonias examinadas

En caso de ausencia de colonias se informara: Recuento de Clostridium perfringens