..Determinar la concentración de albúmina en la clara de huevo por el método de Lowry.

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Cuando a un péptido o proteína en disolución básica se le hace reaccionar con cobre se forma un compuesto colorido por coordinación entre los nitrógenos del péptido con el ión metálico. En el método realizado el reactivo de Folin- Ciocalteu (mezcla fosfomolibdato y fosfotungstano) se añade para incrementar la cantidad de color desarrollado. El aumento en el color ocurre cuando el complejo de cobre tetradentado transfiere los electrones al complejo fosfomolibdato/fosfotungstano, reacción que produce una coloración azul que se lee a 750 nm. Esta reducción con el reactivo de Folin-Ciocalteu ocurre solamente con los residuos de tirosina y triptófano de la proteína.

2.-¿Cuál es la concentración teórica en la albúmina de huevo?

[pic 10]

3.- Que diluciones se tienen que hacer a una solución 10g/100 ml para obtener una concentración de 10 mg/100 mL?

10g/100 ml Tomar de esta disolución 0.1 ml y llevarla a un volumen final de 100

[pic 11]

[pic 12]

4.- En una curva estándar, se debe tener un volumen final igual en todos los tubos? ¿Por qué?

Porque se vería afectada la concentración ya que a mayor volumen menor es la concentración y viceversa de proteína, y se maneja el volumen como una constante para que la única variable sea la concentración expresada en los mg de albúmina.[pic 13]

Análisis de resultados.

Para hacer las determinaciones cuantitativas se elige, en general, la longitud de onda correspondiente a un máximo, pues el error de medición es mínimo y la sensibilidad máxima.(Bradford 1976)

Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe realizar la curva de calibración; absorbancia (A) en función de concentración (c), para lo cual se preparan soluciones de la sustancia de concentraciones conocidas y semide la absorbancia a la longitud de onda elegida.(Stoscheck 1990)

La cantidad de proteínas contenidas en la clara del huevo es de 11g en 100 ml, las principales proteínas que lo constituyenLa principal proteína de la clara de huevo es la ovoalbúmina, un tipo de albúmina que constituye entre el 60% y el 65% del peso de la clara de huevo. (Belitz 2000)

En el método se realizó una dilución tomando primeramente un ml que teóricamente contiene 11 g en un un ml y al ser llevado a 10ml quedó 10 veces diluido. Posteriormente se tomó de aquí un ml y se disolvió en 100 ml, por lo que el factor de dilución fue= a 1000 por lo que la cantidad presente de proteínas fue 0.011g en 100 ml es decir 11mg en 100 ml,retomando la ley de Lambert y Beer sobre la relación que existe entre la absorbancia y la concentración fue posible realizar una curva estándar interpolando la lectura de absorbancia para conocer los mg de proteína contenidos en las muestras problema. Al comienzo de él análisis de datos fue necesario incluir el blanco con una cantidad de proteínas y de absorbancia 0 para que comenzará en el origen el análisis de datos una vez realizado realizó una interpolación y así se conoció la cantidad de proteínas experimentalmente. Por otra parte se llevó a cabo una relación entre la concentración y el volumen para conocer la cantidad de proteínas que se debían obtener.

tubo

Cantidad (ml)

Proteínas experimentales mg

Proteínas

Teóricas mg

1

0.15

0.0165

0.0218

2

0.3

0.033

0.0378

3

0.6

0.066

0.0611

Por contener cada muestra problema tan poca cantidad de proteínas el método más adecuado es el método de Lowry debido a que Tiene la ventaja de ser extremadamente sensible, capaz de detectar cantidades del orden de 10 microgramos de proteína(Fujimoto 1985)

CONCLUSIONES

De acuerdo al análisis de resultados realizado previamente se concluye que el método de Lowry para la determinación de la concentración de la proteína de la albumina de huevo es muy preciso y los resultados no varían mucho de acuerdo a la concentración de albumina de huevo reportada en la literatura.

Bibliografía

- Belitz HD. Aminoaciids peptides and proteins , food chemistry 3ª ed.Berlin sprinter, 2004, 8-14

- Bradford MM (1976): A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 72: 248-254.

- Fujimoto EK, Goeke NM, Olson BJ, Klenk DC (1985): Measurement of protein using bicinchoninic acid. Anal Biochem 150: 76-85.

- StoscheckCM. Quantitation of Protein. 1990. Methods in Enzymology 182, 50-69.