INFORME DE LABORATORIO Cuantificación Espectrofotométrica de Aminoácidos y Proteínas

...

- Cuantificación de proteínas por el método de Biuret.

Después de haber tomado la absorbancia de todas las soluciones obtuvimos los siguientes resultados; tubo 1 (blanco) = 0: tubo 2 =0,35: tubo 3 = 0,048: tubo 4 = 0,372: tubo 5 = 0,457: tubo 6 = 0,582: tubo 7 (clara de huevo) = 0,499: tubo 8 (orina) = 0,041.

Discusión:

Se utiliza la medida de la absorción de la luz emitida por el espectrofotómetro no solo para el reconocimiento de proteínas, sino que también para el reconocimiento de toda biomolécula con la capacidad de absorber la radiación UV. La concentración de la molécula esta relacionada con la absorbancia y la longitud de onda de la radiación, lo que está demostrado en la ecuación de Lamber-Beer.

En el primer procedimiento experimental, se determinó la concentración de los aminoácidos y su capacidad de absorbancia a través de un espectrofotómetro (4). En primer lugar, no se pudo utilizar la glicina a 280 nm, esto se debe a que la glicina es el aminoácido más pequeño en los seres vivos, éste no forma parte de los aminoácidos aromáticos, que son los que tienen la capacidad de absorber luz uv a 280 nm. por lo tanto la glicina no tiene capacidad de absorbancia.

Los aminoácidos aromáticos tienen un gran tamaño dentro de la proteína, debido a su radical. (1)

En el segundo procedimiento experimental, se utilizó una muestra de orina diluida en agua (2), en ésta se encontró una baja cantidad de proteínas, esto se debe a que en los riñones, que es donde se filtran los líquidos en el organismo, se filtran pequeñas cantidades de proteínas, por lo tanto, las proteínas que están contenidas normalmente en la orina son próximas a cero.

Los experimentos realizados se hicieron a través del método de Biuret (3), uno cualitativo (cambios de color) y otro cuantitativo (capacidad de absorbancia), ésta última mencionada en el primer procedimiento. Este es un ensayo general para las proteínas, éstas reaccionan con el cobre, al cual se le unen cuatro nitrógenos del grupo amino, lo que permite identificarlas, por lo tanto, cambia la coloración de un color azul (ausencia de proteína) a uno violeta (presencia de proteína).

Conclusión:

Finalizando el tema, se pudo manipular un espectrofotómetro para realizar las actividades impartidas y entender de manera teórica la función y origen de la espectrofotometría. Por otra parte se determinó la concentración de aminoácidos y proteínas con los métodos empleados (ley de Lambert-Beer y reactivo biuret) en las soluciones trabajadas.

Referencias:

1Berg, J., Tymoczko J., Stryer L. (2009). Composición y estructura de las proteínas. En Bioquímica (pp. 34). Barcelona: Reverté D.L

2David, C. (2013, agosto). Exámen de proteína en la orina. Obtenido de http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003580.htm

3 Herrera, C. (2013, octubre). Determinación de proteínas por el método de biuret. Obtenido de http://prezi.com/ascwzdebptyo/determinacion-de-proteinas-por-el-metodo-de-biuret/

4Nelson, D., Cox, M. (2009). Aminoácidos, péptidos y proteínas. En Principios de bioquímica. (pp. 76). New York: W.H. Freeman and Company.

Anexos:

- Concentración en mg/mL de cada muestra, utilizando los coeficientes de extinción molar de cada especie a 280 nm. a través de la siguiente ecuación:

DO = Ɛ0 * C * l

Triptófano:

[pic 2]

[pic 3]

.[pic 4]

SAB:

[pic 5]

[pic 6]

.[pic 7]