PRACTICA 3 PROTEÍNAS I

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Objetivo

Demostrar la acción amortiguadora del pH de las proteínas del suero sanguíneo.

Método

Estimar los miliequivalentes de HCI y de Na OH gastados para hacer variar el pH del suero sanguíneo, hacia el lado ácido y hacia el lado alcalino, respectivamente y comparar estos resultados con loe obtenidos al utilizar suero desproteinizado o simplemente agua destilada en lugar del suero sanguíneo.

Procedimiento

- Medir en un Erlenmeyer 2 ml. de suero sanguíneo diluido al medio (un ml. de suero más un ml. de agua destilada) y titular con NaOH 0.01N hasta un pH aproximado de 8.5, usando como indicador la fenoltaleína. Anotar el volumen gastado de la soda.

- Repetir el paso 1 y 2 utilizando en este caso agua destilada.

[pic 4]

Resultados

1. Con los datos obtenidos en este experimento complete la siguiente Tabla.

SUERO SANGUÍNEO

AGUA DESTILADA

Gasto de la NaOH 0.01 N en miliequivalentes

Interrogantes

- ¿Cuántos grupos ionizables tiene el tripéptido glutamil-aspartil-histidina?

- ¿Qué carga eléctrica predominante tiene a pH 7.4?

- ¿Cuál es su PI?

- ¿Qué puede decir de la composición de aminoácidos de una proteína cuya acción buffer es en las proximidades del pH 9?

- Una proteína se encuentra a una concentración de 7%. Si al tomar 5 ml. de esta solución, gastamos 1.12 ml. de Na OH 0.1N para hacer variar su pH de 3 a 5, estime con aproximación cuántos residuos de Asp y Glu debe tener dicha proteína, considerando que su peso molecular es de 25,000.

_____________residuos.

EXPERIMENTO 1.3.

DESNATURALIZACIÓN DE LAS PROTEÍNAS Y ACTIVIDAD BIOLÓGICA

Objetivo

- Verificar como la desnaturalización de la proteína, determina la pérdida de su actividad biológica.

Método

Estudio de la actividad de la catalasa de los hematíes en presencia de diversos agentes desnaturalizantes.

Procedimiento

- Rotular 2 tubos de ensayo ( como 1 y 2)y medir respectivamente, 0.1 ml. de sangre diluida (una gota de sangre en 100 ml. de agua destilada)y 0.1 ml. de sangre diluida hervida,

- Medir encada tubo 5 ml. de peróxido de hidrógeno 0.05 M y Mezclar.

- Con ayuda de una varilla de vidrio depositar en el fondo de cada tubo un circuito de papel filtro y tomar el tiempo que toma en cada tubo para subir hasta la superficie.

[pic 5]

Expresión de Resultados

Complete la siguiente Tabla.

TUBO

1

2

Tiempo que tarda en subir el papel hasta la superficie

Interrogantes

- Junto al nombre de cada agente desnaturalizante, escriba su mecanismo de acción:

a) Urea 8M:

b) SDS:

c) DTT:

- Escriba la reacción química catalizada por la catalasa:

- ¿Es la catalasa una proteína simple o conjugada? Fundamente su respuesta.

- ¿Con qué experimento (s) podría demostrar que la desnaturalización no aféctala estructure primaria de la proteína?

- ¿Qué importancia podria tener en clinica la busqueda de actividad catalasica en la orina?