Separación de dos componentes.

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Cálculos: (No.Tubo) (3) = Volumen de elución

Gráfica 1. Valores de absorbancia respecto al volumen de elución.

[pic 1]

DISCUSIÓN:

Al obtener las absorbancias en el espectrofotómetro nos dieron varios valores negativos que al graficar se consideraron como cero y en la gráfica se pudo observar la separación del azul de metileno y la fluoresceína ya que se presentan dos picos diferentes y separados a diferentes longitudes de onda. El azul de metileno presento máxima absorbancia a 668nm y la fluoresceína a 493nm, sin embargo el azul de metileno presenta una absorbancia mínima a 493 nm, es por esto que se observa un ligero pico al principio de la gráfica.

Se tuvieron algunas variaciones debido a que el volumen adicionado a cada tubo no era el exacto y también que cayeron gotas fuera de estos al intercambiar de tubo.

Durante la separación la fluoresceína tiene carga parcial negativa y la alúmina positiva, debido a esto permanece en la columna por las fuerzas de atracción, sin embargo, el azul de metileno presenta poca afinidad por la fase estacionaria debido a que tiene carga parcial positiva al igual que la alúmina por lo que genera fuerzas de repulsión e impide la adsorción por eso es el primero en salir de la columna.

Al adicionar la segunda fase móvil (regulador de fosfatos pH 12), se modifica el pH de la fase estacionaria cambiando a pH alcalino teniendo así carga parcial negativa, generando fuerzas de electrostáticas de repulsión con la fluoresceína por esto sale de la columna.

CONCLUSIÓN:

Al analizar el perfil de elución se dedujo que la primera sustancia en separarse fue el azul de metileno y posteriormente la fluoresceína.

La elución de los componentes de la mezcla depende de las fuerzas intermoleculares que se generan entre la fase estacionaria, fase móvil y los solutos, ya que la afinidad entre estos dependerá de que componente saldrá primero por la columna.

PREGUNTAS EXTRAS:

1.- Especifique y defina los elementos del sistema cromatográfico para esta separación.

Fase estacionaria: Es un medio poroso la cual retiene los componentes de la mezcla por el cual avanzan. Alúmina ácida pH 5.

Fase móvil: Es la aquella que facilita el transporte de los componentes a través de la fase estacionaria. Agua y regulador de fosfatos pH 12.

Soporte: Es en donde se lleva a cabo la cromatografía. Columna de separación.

Solutos: Sustancias a separar. Azul de metileno y fluoresceína.

2.- Defina el término adsorción y empleando fórmulas, esquematice que fuerzas intermoleculares participan en el proceso de separación de los solutos.

La adsorción es el fenómeno de retención de una especie sobre la superficie de un sólido a través de interacciones físicas y químicas.

Durante el proceso de separación del azul de metileno y la fluoresceína, se establecieron interacciones electrostáticas de atracción y repulsión, puentes de hidrogeno, fuerzas dipolo-dipolo y Fuerzas de Van der Waals.

3.-Considerando las propiedades de la solubilidad de los colorantes, indique que modificaciones haría para invertir el orden de la elución.

Al usar alúmina básica presenta carga negativa, por lo que generaría fuerzas de atracción con el azul de metileno y de repulsión con la fluoresceína, y debido a esto saldría primero la fluoresceína de la columna, o también se podría agregar primero regulador de fosfatos y después agua pero no sería la manera adecuada.

BIBLIOGRAFÍA

- http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/5.5Cromatografiadeliquidos_7806.pdf

- http://ocw.uc3m.es/ciencia-e-oin/caracterizacion-de-materiales/material-de-clase-1/Tecnicas_de_separacion_cromatografica.pdf

- Lamarque A., Maestri D., Torres M., “Fundamentos Teóricos-Prácticos de Química Orgánica” [En línea], Ed. Encuentro., Argentina, 2008., ISBN: 978-987-1432-09-07., pág. consultadas: 55-56.