TALLER DE BIOLOGÍA. HELICASAS

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2. Evidenciar como es el mecanismo molecular por medio del cual el enhancer ejecuta su función.

La función del enhancer es aumentar la tasa de transcripción.

-En una electroforesis podemos ver el resultado que la presencia del enhancer causa, ya que veremos más ARN m.

- Para evidenciar como el enhancer se una a la cadena de ADN, podemos usar una exonucleasa que no pueda cortar ahí, debido al complejo proteico que se encuentra sobre la cadena. En una electroforesis veremos un desplazamiento mayor que describe aquella cadena unida al enhancer, que no pudo ser cortada por la exonucleasa.

-También sabemos que el enhancer debe unirse a un factor específico para poder cumplir su función. Una técnica como ELISA puede permitirnos ver esta unión:

*Tenemos anticuerpos tanto para el enhancer como para el factor específico. El anticuerpo contra el enhancer separa el complejo completo.

*Luego se lava y se agrega el anticuerpo del factor específico.

*Por último, característico de esta clase de pruebas, se agrega un anticuerpo contra el anticuerpo para poder evidenciar, por coloración, puedo ver la presencia del factor específico.

3. La bacteria Mycobacterium tuberculosis (Mtb) una vez infecta el pulmón del hospedero es fagocitado por los macrófagos alveolares que intentan eliminar el patógeno a través de diferentes enzimas bactericidas. Cuando la bacteria está en presencia de éstas enzimas bactericidas empieza a expresar la proteína EpB para inactivarlas y así sobrevivir. ¿Explique qué tipo de regulación transcripcional se evidencia en ésta situación? Diseñe el mecanismo de regulación para éste fenómeno y describa un experimento para corroborarlo

La Mycobacterium tuberculosis expresa la proteína EpB para evitar ser fagocitado por los macrófagos alveolares mediante enzimas bactericidas. Como la misma Mycobacterium es la que produce la proteína EpB, esto sería un control negativo, independiente que sea para defenderse de algún agente externo.

Experimento: Primero se introduce células sanas del pulmón en dos tubos de ensayo. Como ya habíamos reconocido la proteína que inactiva las enzimas bactericidas, introducimos en uno de los tubos de ensayo el inhibidor de EpB, luego se toma la bacteria Mycobacterium tuberculosis marcada con anticuerpos específicos con fluorescencia y se introduce en los dos tubos de ensayo, (Coloración: con inmunofluorescencia, un tipo de anticuerpos especificos para la bacteria)

Ambos tubos toman una coloración fluorescente. Como resultado de la inhibición de EpB, las enzimas bactericidas generadas por los macrófagos alveolares ya tendrían vía libre para fagocitar y eliminar el patógeno. Esto se vería evidenciado en la reducción significativa de bacterias coloreadas en el tubo que no posee el inhibidor de EpB, mientras que el tubo que posee el inhibidor de EpB, la cantidad de bacterias no se vería reducida ya que estas podrán inactivar las enzimas bactericidas con la proteína EpB.