Taller de extracción de DNA.

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- ¿Cuál es la función del fenol-cloroformo en la extracción del DNA?

Suele emplearse una combinación de fenol y cloroformo con objeto de eliminar las proteínas, consideradas contaminantes del DNA.

- ¿Qué es un cromosoma? Explique su organización y por qué está asociado a proteínas.

Un cromosoma es cada una estructura altamente organizada, formada por DNA y proteínas, que contiene la mayor parte de la información genética de un individuo. Son los encargados de transportar el DNA (ácido desoxirribonucleico) y los genes durante la división celular.

Los cromosomas eucarióticos son moléculas muy largas de DNA de doble hélice que están estrechamente relacionadas con proteínas llamadas histonas y proteínas llamadas no histonas. Los principales componentes que se obtienen cuando se aísla la cromatina de los núcleos interfásicos son el DNA, las proteínas histónicas, las proteínas no histónicas y el ARN. Las histonas (que son extremadamente básicas) se unen a los grupos fosfato del DNA (cargados negativamente) para formar la cromatina.

Las proteínas adheridas al DNA sirven por un tema de empaquetamiento, ya que las hebras del ácido desoxirribonucleico miden hasta dos metros de longitud, por lo que necesitan compactación. De esta manera se 'enrollan' alrededor de las histonas, y se hace posible su estancia.

- ¿Por qué se puede utilizar un tinte básico para teñir las fibras de DNA?

Se puede utilizar un tinte básico ya que el DNA presenta propiedades ácidas. El azul de metileno (color azul), es un colorante básico, en las células se une a sustancias ácidas que se tiñen de color azul.

- ¿Qué representa la muestra teñida observada en la placa?

La muestra teñida en la placa representa el DNA extraido.

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CONCLUSIÓN

Con la realización de los distintos procedimientos planteados experimentalmente en este laboratorio acerca de la extracción de DNA de tejido animal, podemos concluir lo siguiente:

- El conocer los diferentes pasos que conllevan la extracción y/o aislamiento del DNA del tejido animal conllevara a un mínimo margen de error, estos deben realizarse a pie de la letra para obtener resultados óptimos. Entre ellos tenemos primero exponer el DNA, esto lo conseguimos al romper las paredes de la membrana celular con la ayuda de un mortero y un poco de arena al triturar el hígado de pollo, esta parte también es conocida como disrupción mecánica. El siguiente paso fue la extracción de lípidos y proteínas gracias a la ayuda del SDS y finalmente precipitar el DNA con alcohol al 95% para que las fibras pudieran flotar y así conseguir extraerlas.

- Con la diversa nueva tecnología que existe, se emplean métodos poder extraer el DNA cada vez de una forma más precisa, rápida y eficaz. En nuestra prueba de aprendizaje en el laboratorio, empezamos de una manera simple pero bastante adecuada y económica para extraer el DNA del hígado de pollo, fue de manera casera la cual los materiales utilizados fueron fáciles de conseguir como alcohol absoluto 95%, arena, filtro de café y NaCl. Esta extracción de DNA de forma casera requiere que sus procedimientos se realicen paso a paso siguiendo cada instrucción para obtener el resultado deseado: observar a través del microscopio el DNA, de presentarse algún salto de procedimiento o confusión de los reactivos utilizados puede conllevar a un error.

- La forma más usada para confirmar visualmente la estructura fibrilar y la presencia de DNA que fue extraída es primeramente con la ayuda de un palillo pescar las fibras para colocarlas sobre un portaobjetos, agregarle una gota de azul de metileno y cuidadosamente colocarle el cubre objeto para finalmente colocar nuestra muestra en un microscopio y ya con los conocimientos adquiridos anteriormente acerca de la correcta utilización y partes de un microscopio, es posible enfocar y localizar correctamente la estructura fibrilar de DNA si los pasos anteriores para la extracción fueron realizados correctamente. Además, podemos relacionar nuestros conocimientos teóricos en clases al observar la estructura obtenida.

- Cada reactivo utilizado cumple una función importante en el procedimiento de extracción de DNA, entre los utilizados tenemos el dodecilsulfato sódico, o SDS el cual es requerido para lisar el núcleo y liberar el DNA, además disuelve los lípidos y proteínas de la célula rompiendo los enlaces débiles que los mantiene unidos en la membrana celular causando que estos se precipiten en la solución, sin olvidar que también inhibe la actividad de las nucleasas presentes en la preparación. También, con el uso de alcohol al 95% el DNA es precipitado como un material fibroso y finalmente el NaCl que permite a los ácidos nucleicos ser precipitados de la solución de alcohol debido a que éste escuda la carga negativa del grupo fosfato del DNA, haciendo que se acerquen entre sí y se unan las moléculas de DNA.

BIBLIOGRAFÍA

- Boom, R.; Sol C. J.; Salimans M. M.; Jansen, C. L.; Wertheim-Van Dillen, P. M. & J. van der Noordaa. 1990. “Rapid and simple method for purification of nucleic acids” Journal of Clinical Microbiology 28(3): 495-503.

- Somma, M. 2002. “Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos Sesión nº 4 Extracción y Purificación de DNA”

- Karp, G. 2014. “Biología Celular y Molecular. Conceptos y experimentos”. Séptima edición. McGraw Hill Education. Páginas: 393 a 398.

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INFOGRAFÍA

- Anónimo. 2013. “Propósitos de la extracción del DNA”

http://www.ehowenespanol.com/propositos-extraccion-del-DNA-sobre_144163/

- Anónimo. 2010. “¿Cómo extraer DNA de forma casera?”

http://www.medicinajoven.com/2010/05/como-extraer-DNA-de-forma-casera.html

- Jimenez, L. 2015. Lisis celular por medio de detergentes.

http://www.academia.edu/10194525/Lisis_celular_por_medio_de_detergentes