Practica Recuento microbiano

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Vila Miranda Esther Belen, Jueves B, Subgrupo 2

RECUENTO MICROBIANO

RESUMEN

Resumen estructurado:

Introducción

El recuento microbiano es crucial en microbiología para determinar la cantidad de microorganismos en una muestra. Los métodos incluyen turbidimetría, peso húmedo y seco, recuento en placa, uso de la cámara de Neubauer, filtración por membrana y técnica de tubos múltiples, cada uno con ventajas y limitaciones.

Metodología

• Turbidimetría y Peso Húmedo y Seco:
• Recuento en Placa: Se diluyó licor de carambola casero (½, ¼, 1/8, 1/16), se sembraron 100 uL en agar nutritivo, incubando a 37°C por 24 horas.
• Cámara de Neubauer: Se utilizaron Saccharomyces cerevisiae, añadiendo 0.5 mL a tiempos t0, t1, t2, t3 y t4, contando con un microscopio.
• Filtración por Membrana: Se filtraron diluciones (½, 1/10, 1/100) y se transfirieron al medio de cultivo.
• Técnica de Múltiples Tubos: Se realizaron diluciones (1/20, 1/100, 1/1000) en caldo MacConkey, evaluando la producción de gas.

Resultados

Los métodos de recuento microbiano mostraron resultados variables. La turbidimetría reveló una correlación positiva entre densidad óptica y concentración de microorganismos. El recuento en placa tuvo dificultades en diluciones altas, posiblemente debido a una sobrecarga microbiana. El recuento en la cámara de Neubauer mostró un aumento de células con el tiempo. La filtración por membrana indicó una alta presencia de coliformes en la dilución 1/10. La técnica de tubos múltiples demostró variabilidad en la producción de gas.

Discusión

Los resultados resaltan la importancia de ajustar las diluciones para obtener resultados contables. Se identificaron limitaciones técnicas según literatura y fundamentos.

Conclusión

Los métodos evaluados ofrecen información valiosa para determinar la concentración de microorganismos. Se enfatiza la necesidad de seleccionar el método adecuado según el contexto y los recursos disponibles para un análisis microbiológico efectivo.

Palabras clave: turbidimetría, peso húmedo y seco, recuento en placa, cámara de Neubauer, filtración por membrana y técnica de tubos múltiples.

INTRODUCCIÓN

El recuento microbiano es una técnica esencial en microbiología que permite determinar la cantidad de microorganismos presentes en una muestra. Existen varios métodos para realizar este recuento, cada uno con sus ventajas y limitaciones según el tipo de microorganismo y el contexto del estudio. Entre los métodos más comunes se encuentran la turbidimetría, el peso húmedo y seco, el recuento en placa, el uso de la cámara de Neubauer, la filtración por membrana y la técnica de tubos múltiples. La turbidimetría se basa en medir la turbidez de una muestra utilizando un espectrofotómetro, correlacionando la cantidad de microorganismos presentes con la turbidez medida. El método del peso húmedo y seco implica pesar la muestra antes y después de secarla, donde la diferencia en el peso indica la cantidad de microorganismos presentes. El recuento en placa consiste en diluir una muestra en un medio de cultivo y sembrarla en placas de Petri; los microorganismos se desarrollan en las placas formando colonias que pueden ser contadas. El uso de la cámara de Neubauer es un método de recuento directo que utiliza un microscopio para contar los microorganismos presentes, aunque es laborioso y requiere personal entrenado. La filtración por membrana filtra una muestra a través de un filtro de membrana, que luego se coloca en un medio de cultivo; los microorganismos retenidos en el filtro se desarrollan formando colonias. La técnica de tubos múltiples, o método del Número Más Probable (NMP), estima la concentración de microorganismos mediante diluciones seriadas de la muestra y la observación de cuántos tubos muestran crecimiento en cada dilución. Cada uno de estos métodos ofrece un enfoque diferente para cuantificar las células microbianas y puede ser seleccionado en función de la precisión requerida y el tipo de análisis necesario. (Dos Santos, 2023)

Determinar la concentración y distribución de microorganismos presentes en una muestra utilizando diferentes métodos de recuento microbiano, tales como turbidimetría, peso húmedo y seco, recuento en placa, uso de la cámara de Neubauer, filtración por membrana y técnica de tubos múltiples, para evaluar la eficacia y precisión de cada técnica en el análisis microbiológico.

METODOLOGÍA

TURBIDIMETRÍA y PESO HÚMEDO Y PESO SECO

La determinación del peso húmedo implicó la toma de muestras de la solución inicial, colocándolas en tubos de ensayo previamente pesados. Después, se centrifugaron a por algunos minutos, se pesaron los tubos nuevamente. Para la determinación del peso seco, se siguieron pasos similares, pero luego de la centrifugación, los tubos se llevaron a una estufa a altas temperaturas durante aproximadamente 3 horas. Finalmente, se pesaron nuevamente los tubos para calcular el peso seco. Para turbidimetría se realizó la medida de densidad óptica.

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Figura 1. Procedimiento seguido en el recuento microbiano por turbidimetría

RECUENTO EN PLACA, Células viables

Se tomó la muestra de licor de carambola casero y se realizaron diluciones seriadas de ½, ¼, 1/8 y 1/16. Se sembraron 100 uL de cada dilución en agar nutritivo y se incubaron por 24 horas a 37°C. Posteriormente, se realizó el conteo de células para calcular la concentración, obteniendo un número representativo de 30 a 350 colonias

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Figura 2. Procedimiento seguido en el recuento microbiano en placa

RECUENTO EN CÁMARA DE NEUBAUER

Los microorganismos utilizados en esta práctica fueron Saccharomyces cerevisiae. Se añadieron 0.5 mL para cada tiempo determinado (t0, t1, t2, t3 y t4). En cada tiempo, se contó sobre la cámara de Neubauer inoculando un volumen de 10-15 uL y realizando la lectura posterior en el microscopio.

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Figura 3. Procedimiento seguido en el recuento en la cámara de Neubauer

MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA

Filtración:

Se conectó el equipo de filtración estéril a la fuente de vacío. Se colocó el filtro de membrana estéril sobre el portafiltros con unas pinzas estériles. Se colocó el embudo estéril sobre la base, teniendo cuidado de no estropear la membrana y asegurándose de que quedara bien centrada.