PRACTICA N° 03 RECUENTO EN PLACA

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Ejemplo: dilución 10-2

Placa 1: 85 UFC

Placa 2: 89 UFC

Promedio = 87 U.F.C. por inverso del factor de dilución (10-2)

= 87 x 10-2 U.F.C. /ml ó g.

- Si el número de colonias de las placas de dos diluciones consecutivas están dentro del rango de 30 y 300 U.F.C. considerar el recuento para cada una de las diluciones y establecer la relación de los dos recuentos. Si el cociente es menor que 2, reportar el promedio de los dos valores (caso 1b), pero, si el recuento mayor contiene dos veces o más al menor, se reportará el recuento menor (caso 2b).

Ejemplo:

- Caso 1b:

Dilución 10-1 = 300 U.F.C. x 10 = 3000

Dilución 10-2 = 40 U.F.C. x 10 = 4000

[pic 2]

Como el cociente es 1.3 se reporta el promedio de los dos recuentos, es decir: = 3500[pic 3]

= 35 x 102 U.F.C./g ó ml

- Caso 2b:

Dilución 10-1 = 170 U.F.C. x 10-1 = 1700

Dilución 10-2 = 45 U.F.C. x 10-2 = 4500

[pic 4]

Como el cociente es 2.6 (mayor de 2), se reporta el recuento menor, es decir: 1700 = 17 x 102 U.F.C./g ó ml

- Para la lectura, seguir las siguientes reglas:

- Deben contarse todas las colonias, incluyendo las de “punta de alfiler”.

- Si se desarrollan colonias extendidas sobre la superficie, o el fondo y bordes de la placa, o que se den cadenas de colonias unidas forman un tipo de propagación invasiva de crecimiento que se denomina “spreaders”, se cuenta como uno.

- Cuando el spreader cubre más del 50 % de la placa, ésta no debe contarse.

- Cuando el spreader cubre una superficie menor del 50%, se cuentan las U.F.C. en el resto de la placa, sólo si están uniformemente distribuidas.

- Para informar los resultados del recuento, se debe hae solo con dos cifras significativas de la izquierda, redondeando los valores cuando corresponda a la unidad superior si es mayor de 0.5.

Ejemplo: 142, se informa 140

155, se informa 160

El informe debe decir:

Recuento de microorganismos (tipo): X U.F.C./g ó ml

Cuando los recuentos, se hacen en aquellas placas en las que han desarrollado entre 30 y 300 U.F.C., estamos ante un recuento estándar en placa. Si en todas las placas hubiera más de 00 U.F.C. se estima el resultado contando las U.F.C. en un área conocida de la placa y llevándola al área total de la placa.

Si sólo hubiera placas con menos de 30 U.F.C., se informa igualmente el resultado, expresándolo por g ó ml de muestra.

- SIEMBRA POR EXTENSION EN SUPERFICIE:

Si la siembra es en superficie, se deposita en la superficie de las placas que ya contiene el medio de cultivo solidificada, 0,1 ml de cada dilución. Se siembra por duplicado para cada dilución. Luego de colocada la muestra, se procede a extenderla sobre la superficie de las placas con una adecuada. Incubar las placas a 37°C por 24 a 48 horas, luego hacer la lectura e informar el resultado.

La técnica de siembra por extensión en superficie es más adecuada para recuentos de psicrótrofos y psicrófilos, o muestras en las que se supone hay patógenos para que los microbios no se inactiven con la temperatura del agar licuado.

- RESULTADOS:

- COMENTARIO:

- CUESTIONARIO:

- ¿Cuál es el fundamento del método de recuento en placa?

- ¿por qué, para el recuento de bacterias viables, se escogen las placas que han desarrollado entre 30 y 300 U.F.C.?

- ¿Cuáles son las ventajas de las siembras por incorporación y superficie?

- ¿Por qué se utiliza el término “unidades formadoras de colonias” (U.F.C.)?

- ¿Por qué el método de recuento e placa, nos permite determinar el total de la población viable de bacterias presentes en una muestra de alimentos?

- BIBLIOGRAFIA: