ACTIVIDAD MECÁNICA DEL INTESTINO DELGADO DE RATA (PERISTALTISMO)

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Lo primero que se debe hacer es seleccionar la opción MP35 localizada en la parte superior de la pantalla, se desplegará un menú del cual se debe seleccionar la primera opción (Set Up Channels), en la pantalla que aparece se debe activar el canal 1 (en el cual está conectado el transductor) seleccionando cada uno de los cuadros que se muestran a la izquierda del menú, después se debe seleccionar el cuadro localizado en la parte derecha del menú en la columna correspondiente a Preset, al hacer esta selección aparece una lista de transductores, se debe seleccionar el de Fuerza (0-50 g) y de esta forma el programa ajusta automáticamente todos los valores de amplificación y de filtros correspondientes para este transductor, se debe comprobar que el canal seleccionado registre una señal analógica. Una vez seleccionado el canal y el transductor que será utilizado se debe proceder a la calibración del transductor, seleccione la opción Scaling y aparecerá una ventana que permite llevar a cabo la calibración. Coloque cuidadosamente el gancho en forma de “S” en el transductor de fuerza, en el orificio correspondiente a la sensibilidad de 0-50 g (en el experimento el hilo que estará atado a un extremo del músculo deberá estar amarrado a este gancho), una vez colocado el gancho y sin que esté en movimiento se debe indicar en el renglón correspondiente a CAL1 que el peso corresponde a 0 gramos y entonces se debe seleccionar la opción CAL1, aparecerá un valor de voltaje en la pantalla; después se procederá a colocar con cuidado la pesa de calibración de 5 g anotando el valor en el renglón correspondiente a CAL2 y en el momento en el que esté inmóvil se debe seleccionar CAL2, aparecerá un valor de voltaje que debe ser diferente al de CAL1.

Realizada la calibración se debe regresar a la pantalla inicial y nuevamente se debe seleccionar la opción MP35 y del menú que aparezca se debe seleccionar la segunda opción (Set Up Acquisition), aparecerá una ventana que permite establecer las características de la adquisición de los datos del registro, se recomienda establecer las siguientes condiciones: en la parte superior debe seleccionarse, de izquierda a derecha, “Record”, “Append” y “Disk” con esta selección se podrán registrar segmentos (uno para cada variable) los cuales serán unidos por el programa y guardados en el disco duro de la computadora; en el siguiente renglón aparece la opción para la frecuencia de muestreo, la opción que presenta el programa es de 200 muestras por segundo pero puede modificarse, debajo de esta opción aparece la posibilidad de establecer la longitud total de captura de cada segmento (en unidades de tiempo o de muestras), la opción que aparece en el programa es de 30 segundos pero debe ser cambiada ya que esperamos obtener segmentos que tengan una duración entre 2 y 4 minutos, un valor de 10 minutos evitará la pérdida de información. Establecidas las condiciones de adquisición el dispositivo estará preparado para iniciar el registro tan pronto como se encuentre lista la preparación biológica.

Después de anestesiar a una rata, se procede a sacrificarla por medio de tracción en la parte superior de la médula espinal. Abra el abdomen mediante una incisión en la línea media abdominal para exponer las vísceras. Una vez localizado el intestino delgado, tomarlo desde su primera porción cortando sus uniones píloro-duodenal e íleo-cecal, extraerlo cuidando de no estirarlo ni pinzarlo y colocarlo en una caja de Petri que contenga solución salina de Tyrode fría (colocada en un baño de hielo) y aeración dentro de la solución.

Cortar tramos de intestino con longitud entre 2 y 3 centímetros que correspondan a la región del duodeno (debido a que es la que presenta la mayor movilidad). Sólo si es necesario, inserte una cánula en la luz del segmento intestinal y con una jeringa que contenga solución de Tyrode lave con cuidado los segmentos intestinales.

En una caja de Petri con solución salina coloque el segmento intestinal y ate uno de los extremos con un hilo haciendo pasar la aguja a través de la pared, teniendo cuidado de que no quede cerrada la luz intestinal; deje los cabos del hilo lo suficientemente largos. Realice la misma atadura en el otro extremo, de tal manera que se obtenga un tubo abierto (fig. 1) a través del cual podrá fluir libremente la solución dentro y fuera del intestino.

Sujete con el hilo uno de los extremos al ganchillo del tapón inferior de la cámara de órganos aislados, introduzca el segmento intestinal por debajo de la cámara con ayuda de unas pinzas de disección, coloque el tapón en su lugar (fig. 2)

Proceda a llenar la cámara con solución de Tyrode a 37°C; sujete el otro extremo del intestino al ganchillo del miógrafo, debe tenerse cuidado de no estirar demasiado el segmento intestinal, acople inmediatamente el sistema de aeración, es importante que el burbujeo sea lento ya que si este es excesivo dificultará el registro debido al movimiento ejercido por el aire. La preparación debe estar en baño de maría para mantener constante la temperatura del sistema (fig. 3).

Para iniciar el registro de cada uno de los segmentos debe seleccionarse en la parte inferior derecha de la pantalla la opción “Start” y para suspender la captura se debe seleccionar “Stop”. Entre cada segmento el programa colocará una marca y durante el registro de cada segmento se podrán colocar marcas (oprimiendo F9) y se podrá anotar el significado de cada una de estas marcas.

REGISTRO DE LA ACTIVIDAD BASAL

Con la preparación sumergida en solución de Tyrode a 37°C y con el burbujeo de aire regulado, registre la actividad mecánica generada por el intestino delgado. Siempre al inicio de cada registro de las diferentes variables se deberá tener un registro basal con duración entre 30 y 60 segundos y el análisis de los efectos provocados por las variables se debe hacer con su propio registro basal.

A. EFECTO DE LA TENSIÓN

Produzca una distensión del tejido intestinal, por medio del tensiómetro, aproximadamente del 20 al 30 % de su longitud inicial; registre la actividad mecánica del intestino durante 40 segundos y luego regrese el segmento intestinal a su longitud inicial y continúe registrando durante otros 40 segundos. Detenga el registro.

B. EFECTO DEL CALCIO

Retire la solución Tyrode con la que realizó el registro anterior y coloque en la cámara donde está el intestino solución Tyrode sin calcio, registre durante 60 a 90 segundos. Sin detener el registro se debe proceder a agregar 5 gotas de solución de cloruro de calcio (F9). Suspenda