Actividad enzimatica. MATERIALES Y METODOS

...

MATERIALES Y METODOS

MARERIALES:

Beakers, tubos de ensayo pequeños, baño maría, gradilla, vidrio de reloj, cajas Petri, pinzas para tubos de ensayo, cuchilla o bisturí, papel absorbente, estufa, termómetro, probetas, pipetas, cinta para rotular, pitillos plásticos, varias jeringas(1 y 1oml), balanzas analítica, cucharas desechables, mortero, algodón.

Reactivos y soluciones:

Solución de almidón, solución de lugol, solución de peróxido de hidrogeno al 6%, agua destilada, agua en bolsa, hielo, cloruro férrico (en cristales), ácido acético, hidróxido de sodio o amoniaco, anticoagulante& citrato de sodio), beneditc, MnO2.

Biológico:

Saliva, un pedazo de hígado, un pedazo de riñón, papa, zanahorias, remolacha, sangre fresca, levadura.

Método:

Para el extracto de hígado; previamente el estudiante debe tomar un pedazo de hígado en buen estado y macerarlo en un mortero con agua destilada.

Luego filtre con un pedazo de tela o algodón y conserve el filtrado para la práctica.

Para la siguiente práctica utilice tubos de ensayo grandes. Las muestras de la solución de peróxidos de hidrogeno se deben tener por separados en tubos de ensayos. Esto con el fin de que las soluciones de peróxido sean agregadas al mismo tiempo en cada uno de los tubos que contengan la muestra.

ACCION DE LA INVERSA:

- Tome 3 g de levadura y disuelva en 40 ml de agua destilada; déjela en reposo por 20 minutos y centrifugue o decante. De esta manera, obtiene la enzima invertasa.

- Tome 3 tubos de ensayo y adiciónele 5 ml del extracto de levadura y adiciónele 10 ml de solución de sacarosa al 2% a cada uno.

- Deje un tubo a temperatura ambiente, haga enfriar el segundo y caliente el otro; deje de enfriar y determine glucosa con benedit a los 30 minutos.

ROTULE Y PREPARE CUATRO TUBOS DE ENSAYOS:

- Una vez realizado, agite bien los tubos, luego agregue al mismo tiempo 2 ml de peróxido de hidrogeno en cada uno de los tubos. Describa detalladamente lo que observa y su respectiva explicación.

ROTULE Y PREPARE CINCO TUBOS DE ENSAYOS:

- Agite cada uno de los tubos, agregue al mismo instante las siguientes cantidades de peróxido de hidrogeno:

Al tubo # 1. 0 ml; al tubo # 2. 1 ml; al tubo #3. 2 ml; al tubo # 4. 4ml, al tubo # 5. 6 ml.

ROTULE Y PREPARE TRES TUBOS DE ENSAYOS:

- Espere que el material que este dentro de los tubos tenga la misma temperatura que la de los reactivos baños; luego agite y proceda agregar al mismo tiempo 2 ml de peróxido de hidrogeno a cada uno de los tubos.

ROTULE Y PREPARE TRES TUBOS DE ENSAYOS:

- Agite cada uno de los tubos y agregue al mismo instante 2 ml de peróxido de hidrogeno en cada uno de ellos.

ROTULE Y PREPARE CUATRO TUBOS DE ENSAYOS:

- Agite cada uno de los tubos; a los dos primeros agregue 2 ml de peróxido de hidrogeno.

- A los tubos 3 y 4 agregue 2 ml de solución de almidón, agítelos durante 3 minutos y luego agregue 3 gotas de lugol en cada uno de ellos.

ROTULE Y PREPARE SEIS TUBOS DE ENSAYOS:

- Agite cada uno de los tubos al mismo instante, agregue 2 ml de peróxido en cada uno de ellos.

ROTULE Y PREPARE TRES TUBOS DE ENSAYOS:

- Agite cada uno de los tubos, mida la temperatura de cada uno de ellos y agregue al mismo instante 2 ml de peróxido de hidrogeno. Mida de nuevo la temperatura.

RESULTADOS

Grupo N°1

Tubos de ensayo

1ml extracto de hígado

ENZIMAS

Peróxido de hidrogeno

H2O2

1

1

0 ml

2

1

1 ml

3

1

2 ml

4

1

4 ml

5

1

6 ml

Grupo N°2

Tubos de ensayo

Extracto de hígado

H2O2

1

0 ml

2 ml

2

1 ml

2 ml

3

2 ml

2 ml

4

4 ml

2 ml

E.H

H202

T.R

V.R

0

2 ml

0

0

1

2 ml

1,53

25,66

2

2