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ACTIVIDAD ENZIMATICA: FOSFATASA

Enviado por   •  13 de Febrero de 2018  •  961 Palabras (4 Páginas)  •  465 Visitas

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...

Concentración de PNPP = 0,005 M

Volumen de PNPP en cada tubo = 2 ml = 0,002 L

Volumen de Inhibidor (5x10-2 M) = 0,5 ml

Volumen de ZnCl2 (6x10-4 M) = 0,5 ml

Volumen de Solución enzimática (suero fetal bovino) = 0,5 ml

[pic 2]

[pic 3]

[pic 4]

Calculo del Km y Vmax

Según la ecuación de la línea recta, Y=116,77*X + 60852

1/V0= (Km/Vmax)*(1/ [s])+1/Vmax

1/Vmax=60852

Vmax= 1/60852

Vmax=0,00001643

Luego asumimos que 1/V0=0 tenemos:

0=Km/Vmax*1/ [s]+1/Vmax

0=116,77*X + 60852

-60852/116,77=X=1/ [s]=-1/ [Km]

-521,127002=-1/Km

Km= -1/-521,127002

Km = 0,001918918

2 DETERMINACIÓN DEL TIPO DE INHIBICIÓN

Columna1

[PNPP]

ABSORBANCIA

[PNP]

Vo = [PNP]/15 min

1/[PNPP]

1/Vo

TUBO 1

0,005

0,446

0,00004531

0,00000302

200

331125,83

TUBO 2

0,0025

0,439

0,00004461

0,000002974

400

336247,48

TUBO 3

0,00125

0,327

0,0000335

0,000002233

800

447828,03

TUBO 4

0,000625

0,212

0,00002208

0,000001472

1600

679347,83

TUBO 5

0,0003125

0,129

0,00001384

0,000000923

3200

1083423,62

TUBO 6

0,00015625

0,062

0,0000072

0,00000048

6400

2083333,33

[pic 5]

Según la ecuación de la línea recta, Y=285,27x + 227818

Si, 1/ CÁLCULO DEL KM Y Vm

V0= (Km/Vmax) *(1/ [s]) +1/Vmax

Entonces,

1/Vmax = 227818

Vmax= 1/227818

Vmax= 0,00000439

Luego, asumimos que 1/V0=0

Por lo tanto,

0=Km/Vmax*1/ [s]+1/Vmax

1/ [s]=-1/Vmax/Km/vmax

1/ [s]=-227818/285,27

1/ [s]= -798,604831=-1/Km

Km= -1/-798,604831

Km=0,001252184

Discusiones:

se considera que esta práctica de laboratorio se obtuvo una buena sincronización a nivel grupal del laboratorio además de que obtuvimos muy bajos márgenes de errores, se obtuvieron inconvenientes en determinar ciertas fórmulas como tipos de inhibidores ya que eran más bien confusos y no muy claros.

El inhibidor fue un inhibidor el cual no fue competitivo con la km, ya que siempre permaneció constante, además disminuyo la velocidad de la encima dando como resultado actuando por sí misma.

Se necesitan aumentar un poco las cantidades de sustrato para poder identificar de mejor manera los índices en la gráfica, además de ser un poco más claros en las prácticas.

DETERMINACIÓN TIPO DE INHIBICIÓN.

El procedimiento es muy similar al anterior, solo difiere a que en la solución sin enzima adicionamos 0.5 ml de un inhibidor.

En este caso realizamos la construcción de la gráfica de LINEWEAVER-BURK en la cual comparamos las dos rectas con sus respectivos KM y VM.

Sin inhibidor

Vmax: 0,00001643.

KM: 0,001918918

Con inhibidor

Vmax= 0,00000439

Km=0,001252184

Conclusiones:

Para entender mejor sobre esta práctica se requiere de un básico conocimiento sobre inhibidores

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