ACTIVIDAD ENZIMATICA: FOSFATASA
Enviado por Antonio • 13 de Febrero de 2018 • 961 Palabras (4 Páginas) • 407 Visitas
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Concentración de PNPP = 0,005 M
Volumen de PNPP en cada tubo = 2 ml = 0,002 L
Volumen de Inhibidor (5x10-2 M) = 0,5 ml
Volumen de ZnCl2 (6x10-4 M) = 0,5 ml
Volumen de Solución enzimática (suero fetal bovino) = 0,5 ml
[pic 2]
[pic 3]
[pic 4]
Calculo del Km y Vmax
Según la ecuación de la línea recta, Y=116,77*X + 60852
1/V0= (Km/Vmax)*(1/ [s])+1/Vmax
1/Vmax=60852
Vmax= 1/60852
Vmax=0,00001643
Luego asumimos que 1/V0=0 tenemos:
0=Km/Vmax*1/ [s]+1/Vmax
0=116,77*X + 60852
-60852/116,77=X=1/ [s]=-1/ [Km]
-521,127002=-1/Km
Km= -1/-521,127002
Km = 0,001918918
2 DETERMINACIÓN DEL TIPO DE INHIBICIÓN
Columna1
[PNPP]
ABSORBANCIA
[PNP]
Vo = [PNP]/15 min
1/[PNPP]
1/Vo
TUBO 1
0,005
0,446
0,00004531
0,00000302
200
331125,83
TUBO 2
0,0025
0,439
0,00004461
0,000002974
400
336247,48
TUBO 3
0,00125
0,327
0,0000335
0,000002233
800
447828,03
TUBO 4
0,000625
0,212
0,00002208
0,000001472
1600
679347,83
TUBO 5
0,0003125
0,129
0,00001384
0,000000923
3200
1083423,62
TUBO 6
0,00015625
0,062
0,0000072
0,00000048
6400
2083333,33
[pic 5]
Según la ecuación de la línea recta, Y=285,27x + 227818
Si, 1/ CÁLCULO DEL KM Y Vm
V0= (Km/Vmax) *(1/ [s]) +1/Vmax
Entonces,
1/Vmax = 227818
Vmax= 1/227818
Vmax= 0,00000439
Luego, asumimos que 1/V0=0
Por lo tanto,
0=Km/Vmax*1/ [s]+1/Vmax
1/ [s]=-1/Vmax/Km/vmax
1/ [s]=-227818/285,27
1/ [s]= -798,604831=-1/Km
Km= -1/-798,604831
Km=0,001252184
Discusiones:
se considera que esta práctica de laboratorio se obtuvo una buena sincronización a nivel grupal del laboratorio además de que obtuvimos muy bajos márgenes de errores, se obtuvieron inconvenientes en determinar ciertas fórmulas como tipos de inhibidores ya que eran más bien confusos y no muy claros.
El inhibidor fue un inhibidor el cual no fue competitivo con la km, ya que siempre permaneció constante, además disminuyo la velocidad de la encima dando como resultado actuando por sí misma.
Se necesitan aumentar un poco las cantidades de sustrato para poder identificar de mejor manera los índices en la gráfica, además de ser un poco más claros en las prácticas.
DETERMINACIÓN TIPO DE INHIBICIÓN.
El procedimiento es muy similar al anterior, solo difiere a que en la solución sin enzima adicionamos 0.5 ml de un inhibidor.
En este caso realizamos la construcción de la gráfica de LINEWEAVER-BURK en la cual comparamos las dos rectas con sus respectivos KM y VM.
Sin inhibidor
Vmax: 0,00001643.
KM: 0,001918918
Con inhibidor
Vmax= 0,00000439
Km=0,001252184
Conclusiones:
Para entender mejor sobre esta práctica se requiere de un básico conocimiento sobre inhibidores
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