Aislamiento levaduras

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Fuente: Laboratorio de Fermentaciones, FCIAL-UTA

- Cálculo demostrativo de UFC

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- DISCUSIÓN

En la tabla 4 se muestra las unidades formadoras de colonias que fueron calculadas después del periodo de incubación de las placas vertido que se realizó en los diferentes tipos de medio de cultivo ya que para poder aislar la levadura siempre se requiere de pruebas selectivas para definir en cuál de los medios de cultivo existe un mayor crecimiento de las mismas dando como resultado que existe una mayor estimulación de crecimiento de levadura en YEPD, pero un retraso en la producción de la misma levadura en el agar YEDS, teniendo en cuenta que la dextrosa es el principal sustrato de YEPD la cual aporta mucha energía para el crecimiento de Saccharomyces cereviciae y a pesar de que este tipo de levadura es utilizada por excelencia para la obtención de etanol a nivel industrial debido a que es un microorganismo de fácil obtención y recuperación no es exigente en cuanto a su cultivo.

La sacarosa es una azúcar muy importante pero al ser un disacárido compuesto por glucosa y fructosa a la levadura le es difícil asimilar los dos compuestos y el crecimiento es más lento, de hecho si se desea poner algún tipo de sustrato para el crecimiento de Saccharomyces cereviciae () menciona que el metabolismo de los diferentes sustratos es muy importante ya que se puede conocer cuál es su estructura molecular y la presencia de vitaminas y enzimas que presentan las cuales son o no importantes para el crecimiento del microrganismo requerido.

En cuanto a la determinación del peso seco es decir el contenido de sólidos de las células de levadura que se encontraba en una suspensión de los diferentes medios de cultivo como YEPD Y YEPS, el resultado muestra que el contendido de células no varía mucho en las diferentes muestras ya sea porque las células se separaron del líquido bien por la centrifugación realizada. () menciona que una de las desventajas de este método es que los componentes volátiles de la célula pueden perderse por el secado y puede existir alguna degradación al igual que muestra seca puede recobrar humedad durante el pesado, principalmente si el ambiente tiene una humedad relativa alta.

En la tabla 2 se presentan los resultados de absorbancia los cuales si cambian en las diferentes muestras de los medios donde se realizó la suspensión de levaduras y a pesar de que la variación no es muy apreciable se debe tomar muy en cuenta con la medida que se está leyendo ya que () cita que en la absorbancia lo que se analiza es la relación que existe entre la concentración de la solución este caso las muestras de suspensión y su capacidad de absorber radiación. El fin de este proceso fue cuantificar de la mejor manera las levaduras y () menciona que obviamente, este método requiere de un estudio previo en el que se preparan diferentes diluciones de la suspensión microbiana y para cada dilución se determina el valor de Absorbancia y el Nº de microorganismos/ml.

- CUESTIONARIO

¿Qué otros métodos para identificar la pureza de un cultivo conoce?

Cultivo en tubo: Caldos y Sólido

Los medios pueden presentase sólidos en forma inclinada, caldos o medios semisólidos. Para la inoculación se puede emplear el asa o aguja. Se emplea el asa para inocular especímenes en placa y la aguja de inoculación para la transferencia de cultivos puros de placas a tubos con medio sólido. En los tubos con medio sólido, estos se ponen a enfriar en posición inclinada, de manera que al solidificar queda la superficie inclinada. Los tubos inclinados son útiles para el cultivo de aerobios y anaerobios facultativos. Las características del cultivo tales como pigmento son fáciles de observar en este tipo de cultivo (En, As, & Nuestro, n.d.)

Siembra en medio líquido:

Se introduce el asa de siembra en el tubo con cultivo crecido y se toma un inóculo

que se lleva al tubo estéril con medio líquido (agitándola en el seno del medio) (Enfermeria, 2009)

Siembra en placa:

Se introduce el asa de siembra en el tubo con cultivo crecido y se toma una gota de inóculo que se extiende sobre el agar de la placa deslizando el asa suavemente por su superficie en zig-zag (Enfermeria, 2009)

Siembra en agar inclinado:

Se introduce el asa de siembra en el tubo con cultivo crecido y se toma un inóculo

que se extiende sobre el agar inclinado deslizando el asa suavemente por su

superficie en zig-zag (Enfermeria, 2009)

Técnicas de siembra por difusión en placa

Se usa una varilla de cristal estéril para esparcir la muestra. Lo que hace posible que la muestra sea más fina de tal manera que en la superficie del agar se esparza muy bien (Native, 2012)

- CONCLUSIONES

- Se logró aislar las levaduras de la especie Saccharomyces cereviciae en los dos diferentes medios como son extracto de levadura peptona dextrosa YEPD y extracto de levadura peptona sacarosa YEPS cada uno con diferente sustrato y los nutrientes que aportan el valor energético necesario para que el crecimiento de las levaduras se optimo.

- Se identificó el medio y sustrato apropiado para el aislamiento de las cepas de Saccharomyces cerciciae dando como resultado que el medio de extracto levadura peptona dextrosa YEPD es el más eficiente por el sustrato que posee (dextrosa); el cual es el nutriente más apropiado para el crecimiento de la levadura y su conteo de células por ser la principal fuente de energía.

- Al calcular las Unidades Formadoras de Colonia (UFC) se tuvo como resultado en el agar YEPD una cantidad de 3,05x106 unidades formadoras de colonia por ml; al medir la absorbancia a 700 nm de cada tubo se observó que esta iba bajando de acuerdo a cada dilución realizada y finalmente al determinar el peso seco de la levadura inoculada se obtuvo un peso final de 0,0214 gramos.

- RECOMENDACIONES

- Seleccionar el adecuado sustrato para el crecimiento de las levaduras