Aislamiento y cuantificacion de bacterias

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DISCUSIÓN

Los resultados esperados eran que el número de bacterias disminuyera conforme a la serie de diluciones, sin embargo, como se muestra en la Tabla 1, sólo en tres equipos se contabilizó la presencia de una colonia, diferente tipo de colonia en cada caso, desde la primera dilución hasta la dilución 10-4. Estas diluciones fueron las más aceptables debido a que se redujo el número de colonias.

Una razón por la que no se presentaron desde la primera dilución ciertas colonias es por un manejo inadecuado de las asas bacteriológicas (incineración errónea o falta de incineración) y de las varillas acodadas, siendo probable que en las primeras diluciones no se haya dejado enfriar los instrumentos repercutiendo en un daño de los microorganismos por lo cual no se desarrollaron en el cultivo.

Otra razón por la cual la contabilización de las colonias no fue la esperada es que no se realizó con exactitud la medición en 1 Ml de un tubo a otro.

Al realizar la técnica de estría cruzada (la cual no se reporta en resultados), se trató de seguir las instrucciones con el fin de mantener y aislar los microorganismos bajo condiciones de asepsia. Sin embargo, se sabe que hubo errores como no mantener el asa bacteriológica o la caja de Petri cercana al mechero; por falta de práctica, al realizar las estrías se rompió el agar en algunos casos o no se trazaron correctamente una estría tras otra. También se presentó en distintos casos, la contaminación de los cultivos, ya sea por hablar durante la práctica o por no llevar a cabo un proceso de asepsia adecuado.

Todas estas afectaciones, fueron notorias al revisar que las placas no mostraban un ideal aislamiento de microorganismos.

CONCLUSIONES

-Los microorganismos conviven en un mismo sustrato, estos pueden ser diferenciados unos de otros gracias a diversas técnicas para su identificación y cuantificación tales como la estría cruzada y diluciones respectivamente

-El manejo de un área esterilizada para el cultivo de microorganismos es pertinente para un resultado adecuado de su crecimiento y posterior identificación.

-Las técnicas para identificación de organismos bacterianos hacen mas factible y sencillo el observar organismos aislados de un cultivo provenientes de una muestra o cultivo mixto.

CUESTIONARIO

1.- ¿Por qué al trazar las estrías, se debe tocar sólo el extremo de la serie anterior?

El objetivo de la técnica de estría cruzada es la de diferenciación, por lo que al tocar un solo extremo con el asa bacteriológica se dispersan las bacterias cada vez con menos cantidad de microorganismos y siguiendo una continuidad lo que permite tener una mejor observación del cultivo debido a que se tienen colonias aisladas

2.- ¿Cuál es la razón por la cual solo se deben de considerar para cuantificar bacterias, aquellas cajas que tienen 30 y 300 colonias?

El número total de organismos por colonia que se obtienen en un cultivo durante la primera dilución son de millones e incluso miles de millones, por lo que al tener más diluciones ese número descenderá. Para poder cuantificar confiablemente esos microrganismos en colonias que se desarrollan es más factible y sencillo hacerlo dentro de un rango considerable que sería de 30 y 300 colonias

3.-Después de haber realizado la técnica de espatulado, indique que precauciones se debe tener para minimizar errores en la cuantificación.

Lo primordial es tener un proceso y área esterilizada, esto se logra colocando la espátula en alcohol y posteriormente al calor del mechero, esto en cada aplicación de la alícuota; debe existir un tiempo corto para que la espátula se enfrié, ya que de contrario podría matar a los microorganismos alterando el número final que se cuantifique. La alícuota debe de distribuirse uniformemente sobre el agar para que el tiempo de incubación indicado beneficiará la proliferación del cultivo

4.- ¿Por qué las cajas se deben incubar con la tapa hacia arriba?

Al momento de manipular las cajas desde el momento en que se mandaran a incubar es importante que la tapa este hacia abajo ya que de este modo es menos probable que se abran evitando así el microorganismo salga. Durante la incubación la tapa hacia abajo el agar queda en la parte superior y evita que al condensarse el vapor de agua que generan las bacterias por su metabolismo caiga sobre la tapa, evitando que los microorganismos se diluyan y se mantengan fijos al sustrato; también permite observar colonias, más fácilmente después de la incubación.

LITERATURA CONSULTADA

Oxoid. 1995. Manual de medios de cultivo. UNIPATH España, S.A.

Pelczar M. J., Reid R. D., Chan E. C. S. 1982. Microbiología. 4ª edición.McGraw-Hill.