Determinación de la mutación Ebony (cuerpo color ébano) en Drosophila Melanogaster como alteración autosómica.

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(Tomada de http://insolitanaturaleza.blogspot.com)

(Izquierda: silvestre hembra; derecha: silvestre macho)

Drosophila Melanogaster ebony: presenta ojos color más brillantes que la silvestre, color del cuerpo ébano (oscuro). Venas de las patas y alas mucho más oscuras que las silvestres.

[pic 4]

(Tomada de http://www.exploratorium.edu/imaging)

(Izquierda hembra ebony; derecha: macho ebony)

Ciclo de vida de Drosophila Melanogaster

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Drosophila melanogaster es un insecto holometábolo, es decir, presenta unas etapas larvarias y una etapa adulta separadas por una etapa pupal, durante la cual tiene lugar una metamorfosis completa (Figura anterior ciclo). El ciclo vital de Drosophila dura unos 10 días a 25°C. El huevo de Drosophila se forma durante un período de aproximadamente 3 días y medio. Una vez fecundado, la madre lo deposita en el exterior, iniciándose la embriogénesis. Y es durante esta etapa cuando se determina la polaridad antero-posterior y más tardíamente la dorso-ventral. Después de unas 24 horas, el embrión eclosiona dando lugar a una larva de vida libre que pasará por 3 etapas larvarias (LI, LII y LIII). Durante este período las células larvarias básicamente no proliferan; sin embargo, crecen en volumen debido a la duplicación de su material genético. A los 5 días la larva entra en pupación y se inicia la metamorfosis.

Durante esta etapa, la mayoría de tejidos larvarios son histolizados. Las estructuras adultas se formarán principalmente a partir de la reorganización de los discos imaginales (que darán lugar a las estructuras epidérmicas de la cabeza, tórax y genitales externos del adulto) y los histoblastos (que formarán la epidermis abdominal del adulto). A las pocas horas de vida, la mosca adulta es fértil y se inicia de nuevo el ciclo vital (Montserrat A. 2001).

METODOLOGIA

Preparación del medio de cultivo:

Los materiales utilizados en la preparación de los medios de cultivo fueron:

• 31,25 gr de harina

• 1,5 gr de agar

• 3,75 gr de levadura

• 250 ml de agua

• 31,25 ml de miel

• 0,75 ml de ácido propiónico.

Una vez se pesaron los materiales, se licuó la harina, el agar y la levadura en 125 ml de H2O, la miel y los 125ml restantes de H2O se calentaron y mezclaron con el licuado, la mezcla se revolvió por 30 minutos, hasta que se tornó espesa y finalmente se agregaron 3 ml de ácido propiónico. Esta mezcla se trasvaso a diez frascos de mermelada de 125ml estériles, hasta alcanzar una altura aproximada de 2 cm.

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Después de esto se colocaron tapones fabricados con algodón y gasa y se guardaron en la incubadora.

Obtención de hembras vírgenes

A partir de cepas puras dispuestas en el laboratorio de entomología de la universidad de Nariño, se sembraron las moscas tanto de silvestre como de ebony, se tomó una cantidad apropiada de moscas hembras y machos en 5 frascos con el medio de cultivo y se incubaron por 5 a 6 días a 25°C. Posteriormente se sacrificaron todas las moscas en una morgue (frasco con agua y jabón), dejando únicamente larvas y huevos.

Observación de individuos vírgenes

Transcurrido dos semanas aproximadamente las larvas se han transformado en pupas e inmediatamente nacidas se extrajo las moscas en frascos individuales y se determinó sexo ya que Drosophila Melanogaster presenta dimorfismo sexual.

Observación de los individuos para determinar sexo.

Se durmieron los mocas con éter etílico en una cámara de vidrio provista de un tapón, haciendo uso del estereoscopio se observaron las moscas tanto ebony como silvestre y se determinaron sexos separando machos de hembras.

Diferenciación entre machos y hembras en Drosophila.

Se identificó el sexo de los individuos: Hembras: Presencia de un abdomen puntiagudo, dorso del abdomen con bandas transversales clara y separada unas de otras hasta el final del mismo.

Machos: Menor tamaño que las hembras, extremo del abdomen redondeado, presencia del peine sexual en el primer segmento tarsiano del primer par de patas y bandas transversales fusionadas al final del cuerpo. (Rodríguez R, 2005).

Drosophila Melanogaster Macho y Hembra

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Después de separar machos de hembras se sexo así:

Obtención de F1 y F2

Al tener ya macho y hembras separados se dispuso cinco machos ebony y cinco hembras silvestres (vírgenes), en cada frasco (5 frascos) con medio de cultivo; para el cruce reciproco se dispuso cinco machos silvestres y cinco hembras Ebony (vírgenes) en los frascos de vidrio (5 frascos).

Se esperó aproximadamente una semana y se sacrificó parentales para dejar solo larvas y huevos para que sigan el su clico de vida.

Después de 15 días se obtuvieron para ambos cruces los individuos de la F1 (vírgenes), de estos se seleccionaron individuos de cada progenie (machos y hembras) y se los cruzo siguiendo el procedimiento anterior, con lo cual se obtuvo F2.

Para cada individuo derivado de la progenie F1 y F2 respectivamente, se analizó los caracteres fenotípicos, y se realizaron cruces teóricos basados en patrones hereditarios, finalmente se realizó una prueba de Chi cuadrado con el fin de establecer, sí los resultados obtenidos en el laboratorio se ajustan o no a patrones a los patrones de herencia.

Chi-cuadrado:

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RESULTADOS

- Generación Filial 1 (F1)

- Cruces teóricos