METODOS PARA DETERMINACION DE ANTIBIOTICOS

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McLaughlin y Henion (1992) desarrollaron un método analítico capaz de detectar la espectomicina, higromicina B, estreptomicina y dihidroestreptomicina en riñón bovino. La poca solubilidad de estos compuestos en solventes orgánicos se separó por el uso de matriz de dispersión en fase sólida. El riñón homogeneizado se mezclo con Bondesil cianopropil 40. A continuación, posteriormentes se empaco en 8 ml de la reserva de extraccion, y la fase sólida fué lavada con hexano, etilacetato, metanol y 50% de metanol acuoso bajo una presión reducida (2 en Hg; 1 en Hg= 3386. 38 Pa). Los analitos se aclararon con agua, seguida de 0.05m de ácido sulfúrico bajo presión reducida (1 en Hg). Una alícuota de la solución se concentró a un factor de cuatro y se neutralizo utilizando amonio antes del análisis utilizando ionoaerosol de LC-MS. Una columna de Esperisorbo ODS- 2 fue utilizada con una fase móvil que consistió de 8% de acetonitrilo conteniendo ya sea 10 o 20 mM de ácido pentafluoropropionico como un reactivo que aparea iones. Utilizando una proporción dividida de 5:1, el efluente de columna se introdujo en un intrumento Sciex Taga 6000E triple-cuádruple con una fuente APCI. Utilizando SIM en m/z 351 para espectinomicina (M+H2O+H), m/z 265 para higromicina B ((M+2H)2), m/z 301 para estreptomicina (M+H2O+2H(2) y m/z 293 para dihidroestreptomicina (M+2H)2; estos antibióticos pueden ser detectados en el riñón bovino a una concentración de 20 000 mg/kg. McLauglin (1994), subsecuentemente reportó que el procedimiento de una extracción similar emparejada con LC- MS- MS, fué capaz de confirmar los compuestos arriba mencionados con la neomicina B y cuatro componentes del complejo de la gentamicina C. el rango de recuperación va desde un 25 % (espectinomicina) al 87% (higromicina B). El método es susceptible a la interferencia de los componentes de la matriz. Estos experimentaron problemas con el punto máximo, el tiempo de retención y con la supresión de iones de los componentes de la matriz. Consecuentemente, usaron muestras de tejido enriquecido como control estándar. Utilizando disociación de colisión inducida (CID), fueron capaces de producir tres iones apareados para la estreptomicina, la dihidrestreptomicina, neomicina B y el complejo de gentamicina C. El CID del ion precursor de (M+H2O+H) al m/z 351 resultó que produce iones muy débiles de m/z 333 y 207 que tienen una abundancia relativa de 4 y 2 % respectivamente. La higromicina B requiere un alto voltaje para alcanzar la fragmentación adecuada. Ellos encontraron que no era posible ajustar el voltaje como una función de m/z, por lo tanto, no es posible efectuar la suficiente separación cromatográfica de la higromicina B de otros componentes para permitir el ajuste del voltaje como una función de tiempo.

El análisis de los residuos de aminoglucósidos utilizando la espectometría de masa es todavía lejana del alcance de la mayoría de laboratorios. Sin embargo, la combinación de LC- MS- MS y la dispersión de la fase sólida de matrices ofrecen la posibilidad de confirmar todo sobre estos componentes en el MRL (limite de residuos máximos).

SULFONAMIDAS

Las sulfonamidas son N-derivados de 4 amino-bencenosulfonamidas que se componen de un amplio grupo de compuestos antibacterianos sintéticos; estas actúan compitiendo con ácido p-aminobenzoico en la síntesis enzimática del ácido dihidrofolico esto conduce a una disminuida disponibilidad de los residuos de folatos que son esenciales para la síntesis de purina, metionina, etc. Ellos son inactivos en tejidos necroticos. Estos son ampliamente usados en la alimentación de las granjas animales como uso veterinario con fines profilácticos y terapéuticos. Además, las sulfonamidas actúan como sustancias promotoras del crecimiento. La regulación de la unión europea o bien la regulación de EU. Tienen un nivel máximo de residuos con un límite de 100 µg/kg. En carne y en leche 10µg/kg.

Los residuos de sulfonamidas en alimento son una prioridad porque ellos tienen un carácter potencialmente carcinogénico y la posibilidad de desarrollar la resistencia a antibióticos en humanos. Al mismo tiempo las sulfonamidas pueden usarse en medicina humana contra una amplia variedad de microbios. En el presente el uso de sulfonamidas es primariamente en el tratamiento de infecciones urinarias.

Los métodos analíticos para el análisis de residuos de sulfonamidas se basan principalmente en cromatografía liquida (LC) con detección UV (ultravioleta), mientras que GC- MS después de la preparación de LC y/o la extracción líquido- líquido y derivación de diazometano se aplican para efectuar la confirmación.

El LC-MS se aplico primeramente en el análisis de residuos de sulfonamidas en tejidos animales y leche para consumo humano. Sin embargo, la primera aplicación de LC-MS en este campo fue desde 1982. y es enfocado con la detección de residuos de sulfa-dimetoxinas en orina y plasma de caballos de carreras. La técnica LC-MS aplica la nebulización de efluente de columna dentro de una fuente APCI, la cual fue de 10 años después de este tiempo.

El análisis de empacado de columna SFC-MS de 10 sulfonamidas en la via de interfase de movimiento se describe por Kennedy y col. (1998). El sistema es aplicado al análisis de extracto de riñón porcino conteniendo 3.3 mg/kg de sulfametazina con un volumen de inyección de 8 μl, y[pic 1]26 ng es inyectado. Con el detector UV en línea, el pico de sulfametazina es detectado claramente, mientras que la cromatografía en masa para los fragmentos iónicos de M/Z 214 es requerida para detectar el pico en SFC-MS. La correspondiente experiencia sustraída de la espectometría en masa sufre aún de la interferencia de matriz. 2 métodos de multi residuos para el análisis de sulfonamidas, en muestras de sangre y carne fueron descritas por Kennedy y col. (1998). basados en termo spray y MS-MS tanto en el método LS-MS y el de columna bypass escanea precursores iónicos en grupos característicos de iones a 156 de M/Z.

De los datos revisados se puede concluir que la determinación y confirmación de sulfonamidas en tejido de músculo, no presenta serios problemas. Obviamente, la fortaleza de los procedimientos, es un tópico importante en decidir un método conveniente para propuestas reguladoras. El criterio de confirmación para protocolos reguladores requiere con frecuencia de un 20% de reproducción de los radios de intensidad iónica entre los diagnósticos de iones.

La confirmación de residuos de sulfonamidas fue reportado por porter. (2000) es especialmente para sulfametazina, sulfadiazina, sulfamerazina y sulfaquinoxalina en riñón por medición de electrospray LC-MS y LC-MS-MS.