Determinacion de proteinas por el método de Lowry
Enviado por Albert • 23 de Enero de 2018 • 930 Palabras (4 Páginas) • 655 Visitas
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Método de Biuret
Método de Bradford
Método de absorción en uv (280nm)
ventajas
desventajas
ventajas
desventajas
ventajas
desventajas
En un método general
Es menos sensible
Es más rápido
La reacción se puede completar en 2 min.
Reacciona con los iones amonio
Es rápido
Los ácidos nucleicos también absorben a 280nm
Su A máxima es a 540nm
Tiene que ser en medio alcalino
Es más sensible detecta 1μg/ml
El color varia con diferentes tipos de proteína
Es más sensible
La solución debe ser lo más clara posible
Es más rápido
Necesita más cantidad de muestra
Reacciona con los 20 aminoácidos
Los detergentes interfieren
No existe interferencias con los Buffer
Se requiere un sistema puro
No detecta N2 de fuentes no proteicas
Presenta opalescencia por presencia de carbohidratos
Su A máxima es a 595nm
El color puede unirse a las celdas de cuarzo
No destruye las proteínas
Es solo para aminoácidos aromaticos
Preguntas:
- ¿Cumple su curva la Ley de Bouguer y Beer?
R: Si
- ¿Entre qué límites de cantidad de proteína?
R: En las concentraciones más bajas y más altas de la proteína determinada (25-125μg).
DISCUSIÓN:
En la práctica me toco realizar la curva de calibración en la cual se obtuvo un coeficiente de correlación de .9815 el cual es aceptable, pero al visualizar la grafica se observan los puntos alejados de la linealidad y esto puede deberse a que el día de la realización de la practica me encontraba con gripa y esto genero un poco de distracción en mi manera de trabajar lo cual ocasiono que agregara algunas gotas de mas en los tubos.
Para el análisis estadístico le correspondió elaborar las repeticiones a mi compañero en las cuales obtuvo un %C.V. de 7.24 pero ya que la concentración obtenida para las concentraciones viene de el despeje de la ecuación de la curva y esta nos dio una ordenada al origen negativa la cual se esperaba positiva, dicho resultado también se debe a la forma de trabajar que tuve en el momento del desarrollo de la práctica, teniendo en cuenta no solo que tenia gripa sino que esta es la primer practica que realizo en un año tenía un poco olvidado el manejo de el material en el laboratorio.
De la obtención de la ecuación de la curva es de donde provienen los resultados obtenidos en cuanto a las concentraciones de las interferencias y estas nos dieron como resultado para la práctica una interferencia positiva lo que quiere decir que entonces nuestras concentraciones en las repeticiones nos dieron elevadas por causa de dichas interferencias. Pero al tener en cuenta que él %C.V. es de 7.24 se tiene un poco en duda los resultados obtenidos de esta determinación.
CONCLUSIÓNES:
- El método de Lowry cumple la ley de Bouguer y Beer y sirve para la cuantificación de proteínas
- Es un método específico ya que identifica solo aminoácidos aromáticos.
- El método de Lowry es un método más utilizado en cuanto a los otros métodos y es más sensible que el método de Biuret.
- El método de Lowry con respecto a Bradford es menos sensible y más tardado con el mismo nivel de confiabilidad.
BIBLIOGRAFÍA:
- Voet, Donald. Fundamentos de bioquímica: la vida a nivel molecular. 2° edición. Editorial Panamericana, p.c. 99.
- Roca, Pilar. Bioquímica. Técnicas y métodos. Editorial Hélice, 2003, p.c. 155-158
- http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Proteinas.pdf
ANEXO
Pruebas para establecer diferencias en exactitud y precisión entre los métodos de Lowry y Bradford.
Prueba de la t
tcalculada = D x [pic 10]
X͞1 prueba (Bradford)
X͞2 estándar (Lowry)
D
( X͞1- X͞2)
79.9896
92.0239
-12.0343
89.5006
78.1525
11.3481
83.4298
86.9798
-3.55
83.2274
85.0882
-1.8608
83.2274
76.261
6.9664
90.1077
74.3648
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