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Determinacion de proteinas por el método de Lowry

Enviado por   •  23 de Enero de 2018  •  930 Palabras (4 Páginas)  •  654 Visitas

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...

Método de Biuret

Método de Bradford

Método de absorción en uv (280nm)

ventajas

desventajas

ventajas

desventajas

ventajas

desventajas

En un método general

Es menos sensible

Es más rápido

La reacción se puede completar en 2 min.

Reacciona con los iones amonio

Es rápido

Los ácidos nucleicos también absorben a 280nm

Su A máxima es a 540nm

Tiene que ser en medio alcalino

Es más sensible detecta 1μg/ml

El color varia con diferentes tipos de proteína

Es más sensible

La solución debe ser lo más clara posible

Es más rápido

Necesita más cantidad de muestra

Reacciona con los 20 aminoácidos

Los detergentes interfieren

No existe interferencias con los Buffer

Se requiere un sistema puro

No detecta N2 de fuentes no proteicas

Presenta opalescencia por presencia de carbohidratos

Su A máxima es a 595nm

El color puede unirse a las celdas de cuarzo

No destruye las proteínas

Es solo para aminoácidos aromaticos

Preguntas:

- ¿Cumple su curva la Ley de Bouguer y Beer?

R: Si

- ¿Entre qué límites de cantidad de proteína?

R: En las concentraciones más bajas y más altas de la proteína determinada (25-125μg).

DISCUSIÓN:

En la práctica me toco realizar la curva de calibración en la cual se obtuvo un coeficiente de correlación de .9815 el cual es aceptable, pero al visualizar la grafica se observan los puntos alejados de la linealidad y esto puede deberse a que el día de la realización de la practica me encontraba con gripa y esto genero un poco de distracción en mi manera de trabajar lo cual ocasiono que agregara algunas gotas de mas en los tubos.

Para el análisis estadístico le correspondió elaborar las repeticiones a mi compañero en las cuales obtuvo un %C.V. de 7.24 pero ya que la concentración obtenida para las concentraciones viene de el despeje de la ecuación de la curva y esta nos dio una ordenada al origen negativa la cual se esperaba positiva, dicho resultado también se debe a la forma de trabajar que tuve en el momento del desarrollo de la práctica, teniendo en cuenta no solo que tenia gripa sino que esta es la primer practica que realizo en un año tenía un poco olvidado el manejo de el material en el laboratorio.

De la obtención de la ecuación de la curva es de donde provienen los resultados obtenidos en cuanto a las concentraciones de las interferencias y estas nos dieron como resultado para la práctica una interferencia positiva lo que quiere decir que entonces nuestras concentraciones en las repeticiones nos dieron elevadas por causa de dichas interferencias. Pero al tener en cuenta que él %C.V. es de 7.24 se tiene un poco en duda los resultados obtenidos de esta determinación.

CONCLUSIÓNES:

- El método de Lowry cumple la ley de Bouguer y Beer y sirve para la cuantificación de proteínas

- Es un método específico ya que identifica solo aminoácidos aromáticos.

- El método de Lowry es un método más utilizado en cuanto a los otros métodos y es más sensible que el método de Biuret.

- El método de Lowry con respecto a Bradford es menos sensible y más tardado con el mismo nivel de confiabilidad.

BIBLIOGRAFÍA:

- Voet, Donald. Fundamentos de bioquímica: la vida a nivel molecular. 2° edición. Editorial Panamericana, p.c. 99.

- Roca, Pilar. Bioquímica. Técnicas y métodos. Editorial Hélice, 2003, p.c. 155-158

- http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Proteinas.pdf

ANEXO

Pruebas para establecer diferencias en exactitud y precisión entre los métodos de Lowry y Bradford.

Prueba de la t

tcalculada = D x [pic 10]

X͞1 prueba (Bradford)

X͞2 estándar (Lowry)

D

( X͞1- X͞2)

79.9896

92.0239

-12.0343

89.5006

78.1525

11.3481

83.4298

86.9798

-3.55

83.2274

85.0882

-1.8608

83.2274

76.261

6.9664

90.1077

74.3648

...

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