DETERMINACION Y CUANTIFICACION DE PROTEINAS EN FRIJOL, LECHE Y HUEVO

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Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, debida a la formación de un complejo de Cu en un medio alcalino en compuestos que poseen más de un enlace peptídico, como las proteínas (Cambell et al, 2006) y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

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Figura 1: Reacción de Biuret.

Materiales y métodos

Primero, se dispuso a obtener el extracto de frijol, macerando 2g de frijol, después se agregó 20ml de NaCl al 2% y se filtró al vacío. Para obtener el lactosuero se tomó 50ml de leche y se agregó gota por gota zumo de limón hasta formar un precipitado; el sobrenadante corresponde al lactosuero. La muestra de albumen se obtuvo separando la yema de la clara, dejando sólo la clara en un beaker.

A continuación, se rotularon 5 tubos de ensayo: Blanco, solución patrón, muestra 1, muestra 2 y muestra 3 y a cada uno se le agregó, primeramente, 2ml del reactivo de Biuret.

En el tubo de ensayo rotulado “Blanco” se agregó, además, 2ml de agua destilada; a la “Solucion patrón” se le agregó 2ml de albumina al 1%; en la “muestra 1” se agregó 2ml extracto de frijol, en la muestra 2, 2ml lactosuero; y en la muestra 3, 2ml de albumen.

Después de tener todos los tubos con la solución se llevó a cabo un baño serológico a 37°C y se dejaron durante 10 minutos aproximadamente (hasta lograr tonalidades de azul cielo a violeta). Posteriormente se realizó la cuantificación de la solución por medio de un espectrofotómetro a 540 nm de los cinco tubos, entre cada medición se lavaban las celdas. Se procedió a registrar los resultados.

Conclusiones

Se puede concluir que, efectivamente, aplicando el método Biuret se puede determinar la concentración de proteína en una o varias muestras problema, sin embargo, La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados. Al ser una reacción llevada a cao en un