DETERMINACION DE LA ESTRUCTURA PRIMARIA DE UNA PROTEINA.

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que va quedando liberando el nuevo Ct, entonces debe medirse la velocidad de aparición de Aminoácidos).

5 y 6- Hidrólisis parciales: con ácidos diluidos (la cadena se fragmenta al azar y no se cortan todos los enlaces) o con proteasas específicas.

7- Armar el rompecabezas

8- Determinar la posición de los puentes disulfuro:

Fragmentar una muestra de la proteína que contenga los enlaces intactos (sin reducir ni alquilar).

Aislar los péptidos que tienen los puentes S-S, reducirlos, alquilarlos y determinar la composición en aminoácidos

Comparar con la estructura obtenida anteriormente.

hidrólisis con quimotripsina (Tyr, Phe)

hidrólisis con tripsina (Arg, Lys)

UNIVERSIDAD NACIONAL DE MAR DEL PLATA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

BIOQUIMICA I

PROTEINAS: DETERMINACION DE LA ESTRUCTURA PRIMARIA

PROBLEMA 1. El glutatión es un tripéptido que tiene importancia como regulador de reacciones de óxido-reducción en las células animales. Sugerir una estructura para el mismo sobre la base de los siguientes resultados:

a) Por acción de la quimotripsina no se altera el tripéptido

b) Por hidrólisis ácida se obtienen en cantidades equimoleculares: glicina (Gli), cisteína (Cis) y ácido glutámico (Glu).

c) Por hidrólisis suave se obtienen dos dipéptidos: el primero da en una hidrólisis posterior Cis y Glu y el otro Cis y Gli.

d) Con 2,4-DNFB se obtiene N-2,4-dinitrofenilGlu.

PROBLEMA 2. El análisis de los productos de hidrólisis de un tetrapéptido de peso molecular 316 reveló sólo la presencia de Gli, alanina (Ala) y leucina (Leu). Por degradación de Sanger se obtuvo N-2,4-dinitrofenilGli. Por hidrólisis parcial se obtuvo entre otros, un dipéptido Ala-Gli. Por reacción con carboxipeptidasa la solución mostró una alta concentración inicial de Leu.

a) Sugerir una estructura para el tetrapéptido consistente con los resultados obtenidos.

b) Formular los péptidos que pueden obtenerse por hidrólisis parcial del tetrapéptido.

PROBLEMA 3. Un tetrapéptido dio por hidrólisis total leucina (Leu), serina (Ser), alanina (Ala) y fenilalanina (Fen). El tetrapéptido marcado con 2,4-DNFB dio N-2,4-dinitrofenilFen, N-2,4-dinitrofenilFen-Leu. La hidrólisis parcial dio Leu-Ser, Ser-Ala y Leu-Fen. Formular la estructura del tetrapéptido.

PROBLEMA 4. La hidrólisis completa de un heptapéptido demostró que tiene la siguiente fórmula molecular: Ala2, Glu, Leu, Lis, Fen y valina (Val).Deducir la secuencia de aminoácidos de este heptapéptido a partir de los siguientes datos:

a) El tratamiento del heptapéptido con 2,4-DNFB seguido de hidrólisis parcial dio entre otros compuestos N-2,4-dinitrofenilVal, - N-2,4-dinitrofenilLis y un dipéptido DNF-Val-Leu.

b) La hidrólisis del heptapéptido con carboxipeptidasa produjo una alta concentración inicial de Ala, seguida de un aumento en concentración de Glu.

c) La hidrólisis parcial del heptapéptido formó un dipéptido A y un tripéptido B. Al tratar A con 2,4-DNFB e hidrolizar se produjo Leu marcada con DNFB y Lis marcada sólo en el grupo NH2.

d) La hidrólisis completa de B produjo Fen, Glu y Ala.

e) Cuando se permitió que B reaccionara con carboxipeptidasa la solución mostró una alta concentración inicial de Glu.

f) Al tratar B con quimotripsina se liberó Fen.