Metodo de lowry y metodo de bradford
Enviado por Ledesma • 11 de Enero de 2018 • 2.088 Palabras (9 Páginas) • 438 Visitas
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TABLA No. 4. RESULTADOS DEL ANÁLISIS ESTADÍSTICO. MÉTODO DE LOWRY
Ẋ
S
S2
%CV
µ
76.62
5.37
28.84
7
76.623.8411[pic 21]
[pic 22]
= [pic 23][pic 24]
[pic 25]
Valor de t95% (t de student)= 2.262
[pic 26]
[pic 27]
[pic 28]
TABLA No. 5. EFECTO DE SUSTANCIAS NO PROTEICAS QUE INTERFIEREN EN EL MÉTODO DE LOWRY.
Tubo No.
Sustancia
A590
Cantidad de proteína (µg)
Tipo de interferencia generada
1
Tris 1 M, pH 7.0
0.168
64.6503
Negativa
2
Glicerol al 1% (v/v)
0.215
81.0839
Positiva
3
Detergente comercial al 1%
0.211
79.6853
No se concidera interferencia
4
Dodecil sulfato de sodio (SDS) al 1%
0.231
86.6783
Positiva
5
Ácido tricloroacético (TCA) al 5%
0.190
72.3426
Negativa
6
Fenol al 1%
2.231
785.97
Positiva
7
Mercaptoetanol al 0.1%
0.132
52.000
Negativa
8
Tris 1M, pH 10
0.110
44.3706
Negativa
9
Urea al 5%
0.162
62.5524
Negativa
10
(NH4)2SO4 al 3%
0.133
52.4125
Negativa
El método de Lowry se da en condiciones alcalinas, puesto que el Cu2+ se reduce a Cu+ formando complejos con los enlaces peptídicos, por lo que las sustancias acidulantes, quelantes o reductores de Cu+ algunas interferencias en este método.
DATOS EXPERIMENTALES DEL MÉTODO DE BRADFORD
TABLA No. 6. CURVA DE CALIBRACIÓN DE HEMOGLOBINA. MÉTODO DE BRADFORD
Tubo No.
Cantidad de proteína (µg)
A595
A595
Serie a
Serie b
1
25
0.388
0.438
2
50
0.462
0.515
3
75
0.598
0.631
4
100
0.602
0.628
5
125
0.772
0.687
Operaciones para determinar la cantidad de proteína en µg presente en cada tubo.
Se utilizó hemoglobina 0.25 mg/mL
Tubo 1.
0.1 mL () ()= 25 µg [pic 29][pic 30]
Tubo 2.
- mL () ()= 50 µg[pic 31][pic 32]
Tubo 3.
0.3 mL () ()= 75 µg [pic 33][pic 34]
Tubo 4.
0.4 mL () ()= 100 µg[pic 35][pic 36]
Tubo 5.
0.5 mL () ()= 125 µg [pic 37][pic 38]
GRÁFICA No. 3. CURVA DE CALIBRACIÓN DE HEMOGLOBINA. MÉTODO DE BRADFORD
[pic 39]
Donde
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