Reconocimiento y cromatografía de carbohidratos

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- 6 tubos ensayo de 10 mL - papel filtro - 3 pipetas plástico

- baño termorregulador - 1 propipeta - cámara cromatográfica

- 2 tubos cónicos - centrifuga - 1 probeta 100 ml

Reactivos:

- butanol - etanol - ácido acético - agua - naranja

- nitrato de plata - amoniaco - Reactivo Fehling A y B

- azúcares (glucosa, maltosa, sacarosa, lactosa)

Procedimiento

PARTE A. CROMATOGRAFÍA DE AZÚCARES

Procedimiento:

1) Preparación de la cámara cromatográfica:

- Poner solvente de elución en la cámara hasta que alcance la altura de 1 cm.

- Dejarla tapada durante 30 minutos antes de efectuar la cromatografía.

2) Preparación de la cromatoplaca:

- Recortar una porción de papel Watman.

- Trazar una línea con lápiz a 1 cm de uno de los extremos de la placa.

- Marcar puntos distanciados 1 cm sobre la línea identificándolos con el nombre de la muestra o patrón a sembrar escrito en lápiz.

3) Sembrado de las muestras:

- Con una pipeta Pasteur tomar la muestra que se va a sembrar.

- Tocando con la pipeta depositar una pequeña gota de líquido sobre una de las marcas numeradas de la placa, cuidando que el diámetro de las manchas no supere los 4-5 mm. Secar con secador de pelo o en la estufa.

- Repetir 3 veces la operación de siembra y secado sobre el mismo punto de la placa.

- En cada punto de la placa se sembrará una muestra diferente usando una pipeta limpia para cada siembra.

4) Corrida cromatográfica:

- Introducir la placa en la cámara rápidamente de modo que queden las siembras del lado de la fase móvil.

5) Revelado:

- Pulverizar, cubriendo todo el cromatograma con la niebla del revelador.

* Alternativa, cubrir (con cuidado) con una brocha empapada de revelador todo el cromatograma.

Solvente de elución: n-butanol:ácido acético:agua (2:1:1)

Revelador: nitrato de plata amoniacal. Mezclar volúmenes iguales de nitrato de plata 0,1 mol/L y amoníaco 5 mol/L. Se observan manchas pardas al calentar en estufa a 105 ºC durante 10 minutos.

Con los Rf obtenidos:

1.- Investigue que carbohidatos están presentes en las naranjas y manzanas.

2.- Fundamente el resultado de su cromatografía según lo descrito en la literatura y lo obtenidos con los patrones de azúcares utilizados.

PARTE B. REACCIÓN DE RECONOCIMIENTO DE AZÚCARES REDUCTORAS

Procedimiento:

1) Agregar 1 mL de cada muestra (agua, glucosa, sacarosa, maltosa, lactosa y jugo de manzana) en los 6 tubos de ensayo. (guíese por la figura)

2) Luego, añada a cada tubo 0.5 mL de solución de Fehling A y 0.5 mL de solución de Fehling B.

3) Calentar los tubos en baño termo-regulado a 100ºC por 5 minutos. La reacción será positiva si en la muestra se observa un precipitado de color rojo, y será negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso.

[pic 4][pic 5]

[pic 6]

[pic 7]

Describa lo observado en las experiencias realizadas y responda brevemente las siguientes preguntas:

1.- ¿Qué carbohidratos están presentes en la naranja?. Fundamente según reacción de reconocimiento.

2.- ¿Qué características de los azúcares les permite separarse en un cromatograma?

3.- ¿Qué