Calculo UFC

...

Fuente: Laboratorio de Ingeniería de las fermentaciones.

- Sembrado por estrías

Medio de cultivo YEPD

[pic 40]Fig. 1. Estriado de la dilución 10-1

[pic 41]

Fig. 2. Estriado de la dilución 10-2

[pic 42]

Fig. 3. Estriado de la dilución 10-4

Medio de cultivo YEPS

[pic 43]

Fig. 4. Estriado de la dilución 10-1

[pic 44]

Fig. 5. Estriado de la dilución 10-2

- Siembra por vertido (para conteo de levaduras)

Medio de cultivo YEPD

[pic 45]Fig. 6. Vertido de dilución 10-1

[pic 46]

Fig. 7. Vertido de dilución 10-2

[pic 47]

Fig. 8. Vertido de dilución 10-4

Medio de cultivo YEPS

[pic 48]

Fig. 9. Vertido de dilución 10-1

[pic 49]

Fig. 10. Vertido de dilución 10-2

[pic 50]

Fig. 11. Vertido de dilución 10-4

- DISCUSIÓN

La especie Saccharomyces cerevisiae son un tipo de microorganismos pertenecientes a la familia de los hongos de tipo unicelular incapaces de emplear fotosíntesis para su alimentación pero sí metabolizar hidratos de carbono como glucosa, fructosa, manosa, sacarosa y dextrosa. En la práctica realizada se aisló levaduras de la especie Saccharomyces cerevisiae mediante medios de cultivo ligeramente ácidos (ph 5.8 y 5.4) enriquecidos con dextrosa (YEPD) y sacarosa (YEPS) realizando diluciones (10-1, 10-2,1 0-4, 10-6, 10-8) y aislando los microorganismos mediante siembra por estriado y vertido en placa. Según Negroni 2009, el medio más completo para obtener un buen rendimiento en el crecimiento de levaduras es el YEPD, ya que la dextrosa al ser considerada un monosacárido (unidad de azúcar simple) resulta más fácil su asimilación por parte de las levaduras, como se puede observar en las Fig. 6,7 y 8 del medio YEPD, la proliferación de levaduras es mayor en comparación con el crecimiento que se observa en las Fig. 9, 10, 11 del medio YEPS, ya que la sacarosa a pesar de considerarse como fuente energética para el crecimiento de levaduras es un disacárido, lo que significa que está compuesto de dos unidades de azúcar (glucosa + fructosa) siendo químicamente más difícil de digerir por el microorganismo. Otro factor considerado fue el pH, Cortés 2004, menciona que los medios de cultivo utilizados para el crecimiento de levaduras deben tener un pH bajo (ácido) que oscile entre 4,5 y 5,5 con el fin de inhibir la proliferación bacteriana, y por ende evitar la contaminación del cultivo, sin embargo en el medio YEPD el ajuste de pH realizado fue de 5,8 a diferencia del medio YEPS que fue de 5,4, logrando evidenciar la contaminación del cultivo en la Fig. 6.

Por otra parte se realizó el aislamiento de los microorganismos a través de técnicas microbiológicas de estriado y vertido en placa con el objeto de obtener colonias separadas y cultivos puros, Negroni 2009, dice que existen varias técnicas de aislamiento, sin embargo las más utilizadas se basan en el empleo de un medio de cultivo sólido en el cual los microorganismos dan origen a colonias separadas las mismas que constituyen las denominadas Unidades Formadoras de Colonia (UFC) ya que cada colonia procede de una sola célula al tener un inóculo medido. En las Fig. 1, 2 y 3 se puede apreciar el aislamiento realizado mediante estrías compuestas del cultivo YEPD, mientras que en las Fig. 4 y 5 se observa el estriado del cultivo YEPS, logrando notar el grado de contaminación presente en las mismas, especialmente en la Fig. 1, que se puede atribuir al inadecuado manejo de los instrumentos utilizados, Hernández 2005, menciona que durante la preparación del inóculo y siembra es recomendable mantener condiciones estrictas de higiene y esterilidad en los equipos, porque el cultivo se puede contaminar en el paso de una etapa a otra. Por otra parte en las Fig. 6, 7 y 8 se observa el aislamiento mediante vertido en placa del medio YEPD que a diferencia del aislamiento YEPS observado en las Fig. 9, 10 y 11 es más significativo, Hernández 2005 dice que mediante este tipo de aislamiento (vertido en placa) se puede confirmar la pureza por observación a simple vista (colonias de igual morfología), por observación microscópica o mediante pruebas bioquímicas, siendo este caso una simple observación visual.

Según Tortora, Funke & Case 2007 para la determinación del crecimiento de una población microbiana existen diverso métodos, el más usado a nivel de laboratorio de microbiología es el recuento de Unidades formadoras de colonia en placa y en el caso de que se tratara de organismos filamentosos como los hongos se emplea un método indirecto tal como la determinación del peso seco. El recuento de Unidades formadoras de colonia en la experimentación realizada se lo hizo en la dilución 1 x 10-4 tanto en el medio YEPD como en el YEPS obteniendo como resultado 4,8 x 106 UFC/ml y 3,34 x 106 UFC/ml respectivamente, constatando una vez más que el medio de cultivo con mayor aporte energético y de carbono para el crecimiento de levaduras de la especie Saccharomyces cerevisiae fue el medio YEPD (dextrosa). Además del uso de técnicas microbiológicas para evaluar el crecimiento microbiano, también existen métodos ópticos con el mismo fin los cuales se basan principalmente en medir la cantidad de luz difractada por una suspensión de células. Las partículas pequeñas difractan la luz de manera proporcional a su concentración, tales mediciones se realizan con un espectrofotómetro en unidades de absorbancia (A), Stanier 1992. Para este estudio se utilizó el método de espectrofotometría el mismo que midió la reducción de la transmisión de la luz debido a las partículas de levadura presentes en las diluciones (10-1 a 10-8 ) preparadas del medio YEPD y YEPS cuantificando la luz residual transmitida a una