Curva de calibracion.

...

Inoculación

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2

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[pic 75][pic 76][pic 77][pic 78]UNIVERSIDAD DE AMÉRICA

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Vicerrectoría Académica y de Posgrados

Syllabus de Asignatura

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Inocule de acuerdo al diseño del experimento, cada uno de los frascos (consulte con el profesor el ensayo que le corresponde) en una proporción de 0,5 g/l y 1 g/l de levadura. Activar en baño de maría a 38 °C por 20 minutos. Después de esto, secar los frascos.

Fermentación

Bajo las condiciones anteriormente descritas (según corresponda a su grupo) previamente se han llevado tres unidades experimentales a fermentación, tendrán 24, 48 y 72 horas respectivamente.

Tome cada una de estas unidades experimentales y déjelas reposar, con el fin que la biomasa precipite.

Medición de producto

Cuidadosamente vierta el contenido de cada unidad experimental en una probeta de 100 ml y con ayuda de un alcoholímetro, determine los grados Gay-Lussac contenidos en el volumen depositado en la probeta.

Posterior a ello, devuelva el contenido al Erlenmeyer agite vigorosamente y determine la concentración final de biomasa y glucosa, para cada unidad experimental, conforme el siguiente apartado.

Muestreo y Ensayos

Determinación de Biomasa

Para determinar la concentración inicial de biomasa y glucosa, sacar una muestra de cada uno de los frascos. Para la biomasa tomar 10 ml de muestra, colocarla en un tubo falcon (previamente pesado) y centrifugar a 9000 rpm por 6 minutos. Depositar el sobrenadante en otro tubo (prueba DNS) y pesar nuevamente. El peso de la biomasa (base húmeda) es la diferencia entre el tubo con el sedimento menos el tubo vacío. Se debe determinar teóricamente el peso seco de la biomasa tomando como base el peso en base húmeda.

Determinación de Azúcares

Para determinar el contenido de glucosa, tomar 1 ml de muestra del sobrenadante del proceso anterior y realizar una dilución 1/10. (1mL muestra + 9 mL de agua destilada). Posterior a tener la dilución preparada, en otro tubo limpio tome 1mL de muestra y agregue 1 mL de Sln DNS.

Llleve la muestra a reacción (al baño termostatado durante 5 min),realice un choque térmico con el fin de parar la reacción llevando el tubo a un baño de agua fría durante 5 min. Lea la absorbancia con el espectrofotómetro a 540 nm. Utilizar antes de la medición, como blanco (cero), agua destilada. Si la absorbancia de la muestra, registra un valor mayor a 1; diluir la muestra 2 o 5 veces, de acuerdo a la intensidad del color. Tener en cuenta el factor de dilución en el cálculo de la concentración de la glucosa (factor de dilución = Volumen final/volumen de tomado de la muestra). Se debe multiplicar el factor de dilución a la concentración de glucosa determinada, para hallar el valor real. Utilizar la curva de calibración (correlación concentración de glucosa vs absorbancia) para determinar la concentración del azúcar.

El medio de cultivo se deja en fermentación durante 3 días. Una vez cumplido este tiempo, pesar el medio para determinar la pérdida de peso, y después sacar las muestras para determinar el contenido de glucosa y biomasa, como se estableció anteriormente.

Curva de Calibración de Glucosa

A partir de una solución stock de Glucosa (0.2g/L) prepare las siguientes diluciones:

Concentración de

Tubo

Solución stock

Agua

Sln DNS

Absorbancia

Glucosa g/L

Glucosa (mL)

Destilada

(mL)

(540nm)

(aprox)

(mL)

0

0

8

1

1

0.5

7.5

1

2

1

7

1

3

1.5

6.5

1

4

2

6

1

5

2.5

5.5

1

6

3

0

1

Una vez preparadas las soluciones, aplicar el procedimiento de determinación de glucosa mediante DNS. Si la lectura sobrepasa el valor de 0,9 diluir y medir nuevamente. No olvidar tener en cuenta al factor de dilución, en el cálculo de las concentraciones.

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3

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[pic 92][pic 93][pic 94][pic 95]UNIVERSIDAD DE AMÉRICA

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Vicerrectoría