ENZIMAS MITOCONDRIALES. SUCCÍNICO DESHIDROGENASA.
Enviado por klimbo3445 • 19 de Enero de 2018 • 2.164 Palabras (9 Páginas) • 2.210 Visitas
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Maceración de 5 gramos del tejido libre (hígado de res, carne de res (musculo), corazón de pollo); la maceración es realizada en combinación con arena y 5 porciones de 5ml buffer fosfato. Se realiza centrifugación a la muestra con el fin de separar la enzima del remanente innecesario. Es mantenido en un baño de hielo con el fin de no permitir su activación a un momento inadecuado.
- Seguimiento de la reacción catalizada por la succínica deshidrogenasa.
El montaje de las pruebas es reflejado en la tabla 1 (Anexada); los resultados en la tabla 2 (Anexada).
Para el posterior análisis es necesario tener en cuenta la función de cada sustancia en las preparaciones realizadas.
Azul de metileno: Tiene como función ser el aceptor e electrones de complejo succinato-FADH2. Es utilizado para hacer una detección cuantitativa del estado de oxidación-reducción. Aceptor electrónico artificial coloreado cuando se encuentra oxidado e incoloro cuando se reduce, en la medida en que se re oxida la coenzima FAD.
Aceite mineral: Cuando el azul de metileno se encuentra en contacto con el oxígeno del aire se re oxida tomando la coloración azul y formando peróxido de hidrogeno, por esta razón el sistema se aísla mediante la capa de aceite mineral formada previniendo la oxidación temprana del FADH2.
Succinato de sodio 1%: Tiene la función de reducir al azul de metileno, ya que éste es reducido en lugar del succinato.
Malonato: inhibidor competitivo
[pic 2]
Hígado de res
Debido a la preparación de los tubos es esperado obtener la decoloración en el siguiente orden:
3-2-1 en este orden debido a que se reduce la cantidad de enzima en cada tubo respectivamente lo que indica que a menor cantidad de enzima va a generarse una velocidad catalítica menor; orden de oxidación es observado en el color.
4 que la presencia del malonato inhibe la actividad catalítica de la enzima.
B no debería existir cambio debido a que no hay presencia de succinato de sodio luego no existe reducción del azul de metileno, no hay transporte de electrones.
Los resultados obtenidos, reflejados en la tabla 2 (anexada) mostraron que el orden en la decoloración de las soluciones se dio de la siguiente manera:
3 – 2 – B – 4 – 1
El comportamiento mostrado no resulta como el esperado posiblemente a la preparación inapropiada de las soluciones o del set de tubos y en un caso extremo la rotulación equivocada. No existe explicación diferente al hecho de no haber obtenido el comportamiento según las adiciones en los tubos teniendo en cuenta la función de cada reactivo en el set de tubos enunciado anteriormente.
Gráficamente se tiene el siguiente proceso:
[pic 3]
Grafica 2. Proceso de la decoloración de las soluciones para mostrar el trasporte de electrones gracias a la actividad catalítica de la enzima.
Carne de res
Las enzimas presentes en la carne producen cambios químicos que no siempre son los deseados. El mantenimiento a bajas temperaturas retarda esta actividad e incluso desaparece a temperaturas muy bajas. En las carnes frescas, el envejecimiento (proceso de desorganización progresiva de los sistemas metabólicos de las células) coincide con un incremento de la síntesis de enzimas que influirá en los cambios de color, textura y olor.
Debido a la preparación de los tubos es esperado obtener la decoloración en el siguiente orden: 3-2-1
En este orden debido a que se reduce la cantidad de enzima en cada tubo respectivamente lo que indica que a menor cantidad de enzima va a generarse una velocidad catalítica menor; orden de oxidación es observado en el color.
En el tubo 4 la presencia del malonato inhibe la actividad catalítica de la enzima. Y en el tubo B no debería existir cambio debido a que no hay presencia de succinato de sodio luego no existe reducción del azul de metileno, no hay transporte de electrones.
Los resultados obtenidos, reflejados en la tabla 2 (anexada) mostraron que el orden en la decoloración de las soluciones se dio de la siguiente manera:
1>2=3=4=B
El comportamiento mostrado no resulta como el esperado posiblemente a la preparación inapropiada de las soluciones o del set de tubos y en un caso extremo la rotulación equivocada, o posiblemente al proceso de oxidación generada en dicha muestra. No
Existe explicación diferente al hecho de no haber obtenido el comportamiento según las adiciones en los tubos teniendo en cuenta la función de cada reactivo en el set de tubos enunciado anteriormente.
Corazón de Pollo
A temperaturas cercas a los 30°, para este caso 37° y bajas concentraciones de los reactivos, se cataliza con gran eficacia y sin dar productos secundarios, reacciones muy específicas como lo es la disolución de succinato sódico y azul de metileno (aceptor de H) los cuales permanecen invariables, pero al adicionar una alícuota de corazón de pollo homogenizado, el azul de metileno se reduce y se decolora y comienza la formación de fumarato como se muestra en la siguiente ecuación, la cual se presentó en forma general en la adición de los tres tejidos;
[pic 4]
Luego para la preparación de los tubos se espera obtener la decoloración en el siguiente orden: 3-2-1
En este orden debido a que se reduce la cantidad de enzima en cada tubo respectivamente lo que indica que a menor cantidad de enzima va a generarse una velocidad catalítica menor; orden de oxidación es observado en el color.
En el tubo 4 la presencia del malonato inhibe la actividad catalítica de la enzima. Y en el tubo B no debería existir cambio debido a que no hay presencia de succinato de sodio luego no existe reducción del azul de metileno, no hay transporte de electrones.
Los resultados obtenidos, reflejados en la tabla 2 (anexada) mostraron que el orden en la decoloración de las soluciones se dio de la siguiente manera:
3>2>1>4>B
El
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