Hidrólisis del almidón por Amilasa

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Grafica 1. Comportamiento lineal de muestras problema

[pic 13]

Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el laboratorio de bioquímica, Edificio T-12, USAC.

En la gráfica 1 se puede observar un comportamiento lineal de la concentraciones de azucares reductores obtenidos de la hidrólisis de almidón por la enzima amilasa

Grafica 2. Sitios Reductores Liberados en el Periodo M

[pic 14]

Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el laboratorio de bioquímica, Edificio T-12, USAC.

En la gráfica 2 se observa los sitios reductores totales liberados a lo largo del tiempo por las hidrólisis del almidon luego de identificarlos por el método Somogyi-Nelson

DISCUSION DE RESULTADOS

La estructura básica del almidón es una mezcla de dos moléculas de polisacáridos poliglucosa: amilosa lineal (10-20%) y amilopectina (80-90%) (MacFaddin; p.385).

Previo al análisis de la hidrolisis del almidón se realizó una curva de calibración obteniendo la ecuación de regresión lineal Y = 588.2649596x -0.0351279496 cuyo valor r2 = 0.9984991475 indica que las variables concentración de glucosa y absorbancia (ver tabla no.1) están relacionadas de forma significativa ya que el valor es cercano a 1.

Al realizar la hidrolisis de almidón, se obtuvo una serie de fragmentos de polisacárido resultantes de la hidrolisis enzimática (por amilasas) de las cadenas laterales del almidón como las dextrinas, glucosa y maltosa (Geissman, 1993, p.570).

En la tabla no. 2 se observa un incremento en las absorbancias y en los sitios reductores respecto al aumento en el intervalo de tiempo en el cual se desnaturalizo la enzima α-amilasa por el calentamiento de las muestras.

Al trascurrir mayor cantidad de tiempo, la α-amilasa produjo mayor desnaturalización del almidón, por lo que los azucares reductores formados también incrementaron y en conjunto con el método Somogyi-Nelson, el cual es un indicativo de la cantidad de azúcar reductor en la muestra (Nigam, p.37), permitieron su determinación colorimétrica de las soluciones, siendo la de un tiempo más extenso, la de mayor absorbancia, debido a la alta concentración de azucares reductores determinado por Somogyi-Nelson

CONCLUSIONES

- A mayor tiempo de acción que obtuvo la enzima amilasa produjo mayor cantidad de azúcares reductores.

- Los azucares reductores obtenidos se pudieron cuantificar por el método Somogyi-Nelson, identificándoles por medio de la coloración azul.

- La hidrólisis del almidón obtuvo un comportamiento lineal con un r2: 0.9984, mostrando datos confiables y reproducibles.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Geissman, T. (1974). Principios de química orgánica. España: Reverté. pp. 567- 570

MacFaddin, J. (2003). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica. Madrid, España: Médica Panamericana. pp. 385-388

Nigam, A. & Ayyagari, A. (2007). Lab Manual in Biochemistry, Immunology and Biotechnology. USA: Tata McGraw-Hill. P. 37

Smith, Jr. & Cristol, S. (1972). Química orgánica. Barcelona, España: Reverté. p. 742

Urzagasti, H.; Gonzales, A.; Ramos, L.; Fernández, A.; Guzman, M. & Alvarez, D. (2011). Determinación de la concentración de azúcares reductores en Malus domestica (Rosaceae) por un método fotométrico. Bolivia: Universidad Mayor de San Andrés. Pp. 1, 2

Anexos

Curva De Calibración

Sin el blanco

A = b → -0.0351279496

B = m → 588.2649596

r = 0.999249292

r2 = 0.9984991475

[pic 15]

[pic 16]

C1V1 = C2V2

C2 = [pic 17]

C2 = = 25mg/L[pic 18]

C2 = = 50mg/L[pic 19]

C2 = = 75mg/L[pic 20]

C2 = = 100mg/L[pic 21]

= 1.38*10-4mol/L[pic 22]

= 2.77*10-4mol/L[pic 23]

= 4.17*10-4 mol/L[pic 24]

= 5.56*10-4 mol/L[pic 25]