Inmovilizacion de enzimas

...

anteriormente preparadas a agua hirviendo durante 10 minutos

• Trasferir inmediatamente a un baño de agua-hielo por 2minutos

• Adicionar a cada tubo de ensayo 5 ml de agua destilada, agitar

• Leer la absorbancia la muestra en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm

RESULTADOS

DATOS OBTENIDOS:

N° TUBO A

B 0

1 0.702

2 0.742

3 0.930

4 1.038

5 1.709

• TUBO MUESTRA: 0.632

CURVA DE CALIBRACION

ANALISIS DE RESULTADOS

 Según lo analizado por los métodos de inmovilización de enzimas los procesos de glucosa/ oxidasa o por el de DNS, los dos tienes factores a favor y en contra para la realización de estos procesos sin embargo en el proceso de glucosa/ oxidasa se utilizan microorganismos que puedan degradar el oxígeno, un factor importante que se tiene con este microorganismo es el rango tan amplio que maneja para la inmovilización de enzimas.

 Este proceso si se ve conveniente para la producción de enzimas ya que con estos procesos se ha podido crear un forma más estable de la enzima sin que esta pierda las características que se le atribuyen, en donde una de las más importantes es la reutilización que estas pueden tener, sin embargo este proceso no es 100 % confiable ya que cuenta con algunos inconvenientes como pueden ser: Que en el proceso de inmovilización la enzima siempre va a perder una parte de las características que se le atribuyen, ya que por esto cada vez que se reutilicen van a tener menos características deseadas.

PREGUNTAS ORIENTADORAS:

1) Que otro método se puede aplicar a la practica

1. Atrapamiento

Consiste en la retención física de la enzima en las cavidades interiores de una matriz sólida porosa constituida generalmente por prepolímeros fotoentrucruzables o polímeros del tipo poliacrilamida, colágeno, alginato, carraginato o resinas de poliuretano. El proceso de inmovilización se lleva a cabo mediante la suspensión de la enzima en una solución del monómero. Seguidamente se inicia la polimerización por un cambio de temperatura o mediante la adición de un reactivo químico. El atrapamiento puede ser en geles o en fibras, que suelen ser más resistentes que los geles. En el primer caso, la enzima queda atrapada en el interior de un gel, mientras que en el segundo caso la enzima se encuentra ocluida dentro de las microcavidades de una fibra sintética. El atrapamiento, de gran sencillez desde el punto de vista experimental, requiere poca cantidad de enzima para obtener derivados activos. Como ventaja adicional, la enzima no sufre ninguna alteración en su estructura. De todas formas, el atrapamiento requiere un control riguroso de las condiciones de polimerización, así como la comprobación de que la naturaleza química del proceso no altera los grupos reactivos de la proteína.

2. Microencapsulación:

En esta técnica, las enzimas están rodeadas de membranas semipermeables que permiten el paso de moléculas de sustrato y producto, pero no de enzima. Estas membranas semipermeables pueden ser permanentes (originadas por polimerización interfacial) o no permanentes (generadas por surfactantes, también llamadas “micelas reversas”). Las microcápsulas obtenidas son de forma esférica, con tamaños comprendidos entre 1 y 100 mm de diámetro. Mediante este método se pueden encapsular simultáneamente una gran variedad de enzimas, células o biomoléculas, permitiendo que se lleven a cabo determinadas reacciones que suceden en múltiples pasos.

3. Reactores de membrana:

El desarrollo de reactores o sistemas que contengan enzimas atrapadas ha despertado gran interés en la industria. Estos reactores emplean membranas permeables al producto final, permeables o no al sustrato inicial y obviamente impermeables a la enzima. Mediante una bomba se establece un flujo líquido de sustrato que atraviesa el reactor. En general, en esta metodología, se procede inicialmente a la adsorción de la enzima sobre la membrana que formará el reactor. Esta adsorción se puede realizar de dos formas:

1. mediante el paso de una solución tamponada de enzima a través de la membrana.

2. por contacto continuo de una solución de enzima con la membrana.

4. Unión a soportes

Son los métodos de inmovilización más utilizados y de los que se dispone de una mayor información. La elección del soporte y del tipo de enlace resultan determinantes en el comportamiento posterior del biocatalizador. Se debe procurar que la inmovilización incremente la afinidad por el sustrato, disminuya la inhibición, amplié el intervalo de pH óptimo y reduzca las posibles contaminaciones microbianas. Además el soporte debe tener resistencia mecánica adecuada a las condiciones de operación del reactor y ser fácilmente separable del medio líquido para que pueda ser reutilizado. Se han utilizado una gran variedad de materiales como soportes para la inmovilización de numerosas enzimas. Estos materiales difieren en tamaño, densidad, porosidad y forma, aunque generalmente nos los encontramos en forma de cilindro, hojas, fibras y más corrientemente en forma de esferas. Los soportes pueden clasificarse en dos grandes grupos:

1. Soportes inórganicos. Dentro de este grupo tenemos una gran variedad de soportes, que pueden ser naturales (arcillas como la bentonita, piedra pómez, sílice, etc.) o materiales manufacturados (óxidos de metales y vidrio de tamaño de poro controlado, vidrio no poroso, alúmina, cerámicas, gel de sílice, etc.)

2. Soportes órganicos. Se pueden clasificar en:

Polímeros naturales: a su vez divididos en: polisacáridos (celulosa, almidón, dextranos, agar-agar, agarosa, alginatos, quitina,

5. Adsorción

En la adsorción,