LABORATORIO DE BIOQUIMICA FUNDAMENTAL

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[pic 6]

Calculo de la energía de activación:

Ln= lnA – Ea/R (1/T)

Y= a +mX

-Ea / R=m

-3134.70 K-1 =- Ea / R

-R (-305.421/K)= Ea

R= 8.314J/mol K

-8.314J/mol K (-305.42/k)=Ea

Ea = 2539.51J/mol = 606.66 cal/mol

DISCUSIÓN

En la gráfica número dos, observamos que hay una máxima absorbancia en la cual, existe también un máximo de concentración, esto indica que después de llevar las muestras a 92°C es decir a la obtención de color, significa que los productos que la enzima ha producido han reaccionado con el DNS, entonces la concentración máxima no es de la sacarosa, sino de los productos obtenidos a través de la actividad de la enzima.

De acuerdo a grafica número tres, a la temperatura inversa (0.00309 K-1) existe un máximo de velocidad de reacción ya sea V(UI) o ln(V), y tal como sabemos 323.15 K equivalen a 50°C, esto quiere decir que a los 50°C la enzima tiene un máximo de actividad, en el cual la velocidad de reacción está en su máximo punto, dando a entender que esta es la temperatura optima en la cual la enzima presenta su máximo rendimiento. Obteniendo la energía de activación cuyo valor fue de 606.66 cal/mol podemos confirmar lo que marca la literatura, que la energía de activación con catalizadores corrientes es aproximadamente de 25000 cal/mol y el uso de enzimas disminuye esta energía en muchísimo menos de la mitad de los otros catalizadores.

De acuerdo a la tabla número uno, observamos valores de absorbancia en la muestra 6 igual a cero, debido a que el espectrofotómetro registro datos negativos de absorbancia por lo cual fueron descartados, recordemos que esta muestra se trabajo arriba de los 50°C, esto quiere decir que al existir cero absorbancia sencillamente quiere decir que no hubo productos dados por la enzima, debido a que esta se desnaturalizo y por lo tanto no hubo reacción enzimática alguna.

CONCLUSIÓN

Para toda enzima existe una temperatura óptima, es decir en la cual presenta su máximo rendimiento, sobrepasando esta temperatura óptima la enzima se desnaturaliza y por lo tanto no hay actividad enzimática.

- La temperatura óptima para la enzima de la práctica número tres, fue de 50°C.

- La velocidad de reacción es directamente proporcional a la temperatura hasta la T óptima; es decir, al sobrepasar la T óptima la velocidad de reacción será igual a cero.

- A 92°C la velocidad de reacción (v0) fue igual a cero.

- Las enzimas reducen drásticamente la energía de activación en comparación con catalizadores no enzimaticos

RESULTADOS; EEFECTO DE LA CONCENTRACION DE LA ENZIMA SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN

A continuación en el se muestran los resultados de absorbencia obtenidos para cada una de las concentraciones de sacarosa.

Abs

(540nm)

Concentración

(μmol AR)

Concentración

(μmol Enzima)

Vo

(U.I.)

0.95

0.23

1

0.023

0.129

1.6

2

0.16

0.267

2.7

3

0.27

0.418

4.5

4

0.45

0.473

5

5

0.5

Los valores de concentración fueron calculados a partir de la ecuación de la curva tipo de azucares reductores de la práctica 2. Para conocer la actividad enzimática se utilizó la siguiente ecuación, que está dada en unidades de invertasa.

[pic 7]

[pic 8][pic 9]

A partir de estas gráficas, que corresponden a la cinética de Michaelis-Menten, se determinó que la Vmax=1.3 U.I. y una velocidad media de 0.0125 mol/l de sacarosa.

[pic 10]

Ahora bien, se puede calcular el valor de la constante de M-M a partir de la siguiente ecuación

[pic 11]

Haciendo analogía con la ecuación de la recta, se tiene que la pendiente en este caso es Km/Vmax=0.0423

Y la ordenada al origen Vmax=3.5637 U.I.

Por lo tanto el valor de km=0.1498mM

En resumen lo obtenido fue:

Parámetro

Ec M - M

Ecuación L-B

Km

0.1498 mol/l

0.0125 mol/l

Vmáx

3.5637 U.I.

1.3 U.I.

DISCUSIÓN:

Lo que muestran estas gráficas, es como aumenta el producto que se obtiene cuando se tiene una enzima en un sustrato que es variable, lo que también se puede ver, una vez conocida la teoría, es que a una mayor concentración de sustrato, se transforma una gran cantidad de Sacarosa que pasa

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