Que los alumnos conozcan sobre tinciones.

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V.4.3 Tinción de Ziehl-Neelsen

La tinción de Ziehl-Neelsen es la técnica comúnmente usada en el diagnóstico rutinario de tuberculosis. Es una técnica rápida, fácil y de bajo costo, lo que permite que se pueda realizar en casi cualquier laboratorio clínico. Esta tinción permite diferenciar a las bacterias en dos grupos: aquellos que son capaces de resistir la decoloración con alcohol-ácido y aquellos que no lo son La sensibilidad de esta tinción para identifi car bacilos ácido-alcohol resistentes es del 74%

El género Mycobacterium es el único miembro en la familia Mycobacteriaceae y está relacionado con otros géneros que contienen ácidos micólicos (Gordonia, Tsukamurella y Rhodococcus), los cuales también pueden ser teñidos con esta tinción. La pared celular de las micobacterias es extremadamente compleja en cuanto a su composición bioquímica está compuesta por ácido mesodiaminopimélico, alanina, ácido glutámico, glucosamida, ácido murámico, arabinosa y galactosa.

Elaboración:

Fucsina para Ziehl Neelsen: Carbolfucsina: solución de fucsina fenicada:

Fucsina básica 0.3 g

Alcohol etílico 95% 10 ml

Solución acuosa de fenol al 5% 90 ml

Decolorante para Ziehl Neelsen: solución de alcohol ácido:

Alcohol etílico 95% 97 ml

Ácido clorhídrico 3 ml

Azul de Metileno para Ziehl Neelsen:

Azul de metileno 0.3 g

Agua purificada 100 ml

Colocar un pequeño trozo de papel de filtro un poco más largo que el tamaño del preparado sobre el portaobjeto. Importante: el papel de filtro tiene que estar por encima del extendido.

- Cubrir el extendido con Fucsina para Ziehl Neelsen (carbolfucsina). Flamear por debajo del portaobjeto hasta el desprendimiento de vapores blancos (evitar que se produzca la ebullición por exceso de calor). Dejar enfriar 5 minutos y repetir el flameado hasta nuevo desprendimiento de vapores blancos. Dejar enfriar 5 minutos. Cuando esté frio, mediante el uso de pinzas, quitar y descartar el papel de filtro.

- Lavar con agua corriente.

- Cubrir con Decolorante para Ziehl Neelsen. Dejar 2 minutos. Realizar

Sucesivos lavados hasta que no se desprenda más colorante aproximadamente 2 minutos; pero en el caso de preparados más gruesos, puede requerirse mayor tiempo).

- Lavar con agua corriente.

- Cubrir con Azul de Metileno para Ziehl Neelsen. Dejar 30 segundos.

- Lavar con agua corriente durante 30 segundos.

- Secar el extendido y observar al microscopio, los bacilos se tiñen de color rojo fucsia

[pic 6] [pic 7]

Interpretación:

Los “bacilos ácido-alcohol resistentes” (BAAR) aparecen de color rojo sobre un fondo azul claro, mientras que otros gérmenes o células toman distintas tonalidades de azul.

Microorganismos

Color

Mycobacterium tuberculosos

Rojo

Staphylococcus aureus

Azul

Escherichia coli

Azul

V.4.4 Tinción negativa

La tinción negativa fue desarrollada originalmente para microscopia de luz con el fin de rodear y delinear las bacterias no teñidas u otros materiales biológicos. Este método es muy útil, aunque está limitado por la presencia de un fondo oscuro que no permitirá la correcta identificación de forma nítida y detallada de los componentes de dichas estructuras.

En microbiología, la tinción negativa proporciona un resultado presuntivo de la presencia de Cryptococcus neoformans, microorganismo causante de meningitis en pacientes con inmunosupresión, siendo la técnica más utilizada para poner de manifiesto su cápsula.

La principal dificultad con la tinción negativa es que los microorganismos tienden a contraerse durante el periodo de secado, para evitarlo, se ha optado por usar la tinción negativa húmeda, en la cual los organismos se suspenden en una película de tinta china o mancha oscura y el contorno de la cápsula puede ser observado sin el peligro de contracción.

Pueden producirse falsos positivos en presencia de levaduras de los géneros Rhodotorula, Candida y otras especies de Cryptococcus, igual que por artificios como los leucocitos.

Elaboración:

Consiste en colocar una gota de muestra y esparcirlo como con los demás cultivos sobre una porta objetos.

Al portaobjetos sin pasarlo por el mechero se le colocan unas gotas de tinta china.

Se observa al microscopio, se observan como las estructuras biológicas del Cryptococcus neoformans no son teñidas por la tinta china lo cual mejora la resolución de la microscopia.

[pic 8] [pic 9]

Interpretacion:

Prueba positiva: Cryptococcus neoformans

Prueba negativa: no se debe apreciar estructuras

V.4.5 Tinción de azul de algodón de lactofenol

El examen microscópico es de gran importancia en micología para la observación de las diferentes especies de hongos de interés clínico.

La tinción de azul algodón de lactofenol no es considerada una tinción diferencial, sin embargo, posee características tintoriales que permiten observar cada uno de los componentes fúngicos y apreciar fácilmente las estructuras para una adecuada identificación. El fenol inactiva las enzimas líticas de la célula e impide que ésta se rompa; de igual forma, destruye la flora acompañante e inactiva a la célula, quitándole