SEPARACIÓN DE PROTEINAS POR ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA.

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Gráfica 1. Gráfica de Ferguson para la movilidad electroforética relativa promedio de proteínas seroalbúmina (suero), Caseína (yogurt) y conalbúmina (clara).

- Concluya acerca del tamaño molecular relativo de las proteínas y sus cargas eléctricas relativas al pH del regulador de trabajo (8.7 a 9.1)

- Según lo observado en la gráfica de Ferguson, la pendiente nos dice el tamaño molecular relativo, quedando de la siguiente forma, ordenado de menor a mayor: Clara (0.0156), Yogurt (0.0219) y Suero (0.0307)

- La proteína con menor carga relativa es la de la Clara seguido de la proteína del Yogurt y posteriormente la del Suero.

- Diga cual %T recomienda para la separación de las proteínas de cada muestra, ¿Por qué?

- El %T que logró una mejor resolución y que por lo tanto sería el porcentaje óptimo para la separación es:

- Para seroalbúmina: 12.5%

- Para conalbúmina: 7.5%

- Para caseína: 7.5%

- Escriba la reacción completa para la copolimerización de la acrilamida y la bis-acrilamida por radicales libres, ¿Qué función tienen el TEMED y el persulfato de amonio?

- TEMED: Las aminas terciarias como el N, N, N, N´-tetrametilen-diamina (TEMED) se emplean como catalizadores de esta reacción, porque causan la formación de radicales libres del persulfato.

- Persulfato de amonio: La polimerización se inicia con la formación de radicales libres del monómero, que se producen por radicales libres de oxígeno, por causa de la acción de iones persulfato. 3

- Mencione una aplicación de la electroforesis preparativa y una de la electroforesis analítica

- Electroforesis analítica: orientada a la búsqueda de propiedades de un solo componente. Análisis de antibióticos, La aplicación de la electroforesis en los estudios de los antibióticos se remonta a la década de 1950. Otros estudios se efectuaron para mejorar las técnicas electroforéticas y antibióticos nuevos. Estos medicamentos, como la penicilina, se encuentran entre los fármacos ampliamente prescritos en contra de las infecciones bacterianas. Con la electroforesis, los expertos no sólo son capaces de sintetizar nuevos antibióticos, también son capaces de analizar qué tipos de bacterias son resistentes a los antibióticos.7

- Electroforesis preparativa: orientada a la separación entre gran cantidad de componentes. Análisis de Vacunas, La vacuna es un análisis de las muchas aplicaciones importantes de la electroforesis. Hay varias vacunas que han sido purificadas, procesadas ​​y analizadas a través de la electroforesis, como la vacuna contra la influenza, la vacuna contra la hepatitis y la vacuna contra la polio. Los pasos exactos realizados en el análisis de la vacuna, sin embargo, no se pueden determinar debido a razones de confidencialidad de las empresas farmacéuticas.7

- Defina el término electroferograma.

- Un electroferograma es un gel teñido donde se observan bandas de separación de proteínas al aplicar un campo eléctrico.

DISCUSIÓN

En cuanto a las características de los electroferogramas, primero podemos observar que los geles después del tratamiento dado aumentaron apreciablemente su volumen. El %T que logró una mejor resolución y que por lo tanto sería el porcentaje óptimo para la separación de cada proteína es: Caseína (yogurt) 7.5%, conalbúmina (huevo) 7.5% y seroalbúmina (suero) 12.5%.

Realizamos la gráfica de Ferguson en donde con la movilidad electroforética relativa promedio de cada proteína en los distintos porcentajes de concentración final de acrilamida, obtuvimos una recta para cada proteína en donde con sus ecuaciones, la pendiente nos da el tamaño molecular relativo y la ordenada al origen, la carga neta relativa; con esto podemos entonces analizar que, ordenado de menor a mayor peso molecular relativo: Clara (0.0156), Yogurt (0.0219) y Suero (0.0307)

Basándonos en la bibliografía, los pesos moleculares de cada proteína son: Caseína: 29 000 Da, Seroalbúmina: 67 000 Da, y Conalbúmina: 78 000 Da, por lo que podríamos decir que, ya que no se localiza un error en la realización de la electroforesis, la proteína identificada no es la Conalbúmina si no alguna otra proteína de la clara de huevo con un peso molecular menor como lo puede ser, y de acuerdo a la posición de la banda seleccionada, la proteína Ovomucoide (28 000 Da), glicoproteína (24 000 Da), o Cistatina (17000 Da) 6.

CONCLUSIÓN

- Se logró la separación e identificación de 3 proteínas distintas, caseína, seroalbúmina y una proteína de huevo que no se puede identificar con total certeza.

- El tamaño óptimo de poro de gel para la separación de Caseína es de 7.5%

- El tamaño óptimo de poro de gel para la separación de la proteína de la clara de huevo es de 7.5%

- El tamaño óptimo de poro de gel para la separación de Seroalbúmina es de 12.5%

BIBLIOGRAFÍA

- http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/lab-bioq-gen/archivos/Lomonte%20-%20Cap13%20PAGE.pdf (Consultado 24/04/16 01:18 pm)

- https://bioquibi.webs.ull.es/practicas/4.pdf (Consultado 24/04/16 01:25 pm)

- https://books.google.com.mx/books?id=YQBQ0IE74SMC&pg=PA174&lpg=PA174&dq=conalb%C3%BAmina+peso+molecular&source=bl&ots=1THa8axf_k&sig=oum24eCmEPshbwfwaZLS5pKIj6c&hl=es-419&sa=X&ved=0ahUKEwjR--bW8afMAhUjt4MKHQyYCHIQ6AEITTAI#v=onepage&q=conalb%C3%BAmina%20peso%20molecular&f=false (Consultado 24/04/16 02:00 pm)

- http://mexcoat.com/pintura-electroforetica/ (Consultado 24/04/16 02:30 pm)

- http://www.ehowenespanol.com/lista-aplicaciones-electroforesis-sobre_117270/ (Consultado 25/04/16 09:31 pm)