Informe No.7 “Efecto del pH y la concentración en la intensidad de fluorescencia de Riboflavina”.

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r2=0.8571

r=0.9257 y=0.0026x+5.0035

r2=0.7431

r=0.8620

Disolvente H2O HCl 0.1M CH3COOH 0.9M NaOH 0.1M

CÁLCULOS

Para preparar la solución madre de 50 ppm de riboflavina.

100mL1 mg(1ppm)

250mL0.25mg

A 50 ppm

(0.25mg) x (50 ppm) = 12.5

12.5 mg/ 1000 = 0.0125 pesados para preparar la solución madre.

PREGUNTAS ADICIONALES

1.-¿Por qué se deben conocer las longitudes de onda de máxima excitación y de máxima emisión?

Porqué para hacer una determinación cuantitativa de un compuesto por fluorescencia es necesario conocer las longitudes de onda de máxima excitación y máxima emisión, para así poder elaborar una curva de calibración representada por la intensidad de emisión contra la concentración del analito. Por interpolación con dicha curva se obtiene la concentración del compuesto usando el dato de su valor de emisión.

2.-Diga cuáles son las formas coenzimáticas de la riboflavina y cual es su papel en el metabolismo celular.

La riboflavina (B2) tiene dos formas coenzimáticas, flavina adenina dinucleótido (FAD) y flavina mononucleotido (FMN), los cuales son requeridos en reacciones de oxidación-reducción catalizadas por las deshidrogenasas ligadas a la flavina. (5)

Figura 3.Estructuras químicas de la Flavina Adenina Dinucleótido (FAD) y la Flavina Mononucleótido (FMN).

La riboflavina o vitamina B2 es un nutriente esencial en la nutrición humana y juega un papel clave en la producción de energía. La vitamina B2 es necesaria para procesar los aminoácidos y las grasas, y ayudar a convertir los carbohidratos en el combustible que el cuerpo utiliza. Bajo ciertas condiciones, la vitamina B2 puede actuar como un antioxidante. La vitamina B2 es un intermediario en la transferencia de electrones en las reacciones de oxidación-reducción celular que generan energía a partir de proteínas, carbohidratos y grasas. Las coenzimas de riboflavina son también importantes para la transformación de la vitamina B6 y ácido fólico en sus formas activas, y por la conversión de triptófano en niacina.(6)

3.-Ejemplos de aplicación de la Fluorometría.

Una de las aplicaciones de la fluorescencia en medicina es en la detección de la porfiria dental. En medicina la sustancias fluorescentes se suele aplicar in vitrio (no in vivo, porque dañarían a los pacientes) (7) . Sirven para marcar cromosomas y poder ver mejor el ADN y detectar síndromes. Estudio analógico del cáncer: en este caso las sustancias fluorescentes distinguen las células tumorales, de las buenas (se dirigen a las células tumorales y emiten fluorescencia cuando están en ellas) Pueden servir para marcar moléculas con el fluorocromo (marcando el anticuerpo) de la célula tumoral.

DISCUSIÓN

Para la realización de la práctica se utilizó un fluorometro de filtros (Flurometer Jenway 6270) el cual , utiliza filtros para longitudes de onda definidas,el filtro utilizado para la excitación fue 425 nm y el de emisión fue de 540 nm, cabe señalar que la emisión se lee a mayor longitud de onda debido a que una parte de la energía producida por la excitación, es cedida.

Como se observa en la figura 1 la concentración es directamente proporcional a la intensidad de fluorescencia, esto es debido a que a mayor concentración de riboflavina existe un mayor número de moléculas las cuales pueden excitarse y emitir fluorescencia. Esto gracias a la estructuras resonantes que llega a presentar la riboflavina, ya que al irradiar la muestra, se provoca la excitación de los electrones en dichas estructuras y posterior a esta excitación y al volver a su estado basal es cuando se produce la emisión, que es lo que detecta el fluorometro.

Nuestra curva de calibración nos muestra que el disolvente ideal para la Riboflavina es el H2O ya que al tener un coeficiente correlación de 0.9953 promueve que la curva sea de tipo lineal y proporcional, y al también tener la pendiente más alta nos muestra que ese disolvente tiene la mayor sensibilidad para hacer alguna determinación. Como se muestra en la tabla 2 con respecto a la pendiente y el coeficiente de correlacion el segundo disolvente más óptimo sería el CH3COOH, seguido del HCl y por último tendríamos al NaOH.

Al comparar las figuras 1 y 2 se observa que existe un punto de concentración en el cual se pierde la linealidad, esto es debido a que a muy altas concentraciones de riboflavina al producirse la emisión (antes mencionada), las moléculas que están adyacentes entre si toman esa energía como energía de excitación, esto provoca que no siga existiendo una relación lineal, pues deja de producirse una mayor fluorescencia.

Otro factor importante visualizado en la práctica fue el pH, el cual estructuralmente, afecta la conjugación de todos los enlaces, las nubes de los electrones y resonancia de la molécula. En la tabla 1,se muestra el pH que posee cada disolvente. El pH en el cual se obtiene mayor intensidad en la fluorescencia fue a pH de 6 (agua destilada), por lo que podemos inferir que en dicho pH o cercano a este, puede estar su pH óptimo, el cual debe ser ligeramente ácido.

CONCLUSIONES

El pH tiene un efecto directo sobre la intensidad de fluorescencia, la riboflavina posee un pH óptimo entre 3 y 6.

Una alta concentración de riboflavina conlleva a una autoabsorbancia de la intensidad de fluorescencia.

Se empleó y conocio la correcta manipulación del equipo Jenway 6270 Fluorometer.

REFERENCIAS

1. http://www.ugr.es/~decacien/Planes/Quimica/Plan%201997/temarios/671111d-archivos/fundamentos/SEMINARIO%203.PDF

2.http://www.manualmoderno.com/apoyos_electronicos/9786074482911/galeria_entrada.php?cap=12&imagen_inicial=3

3.- Gennaro Alfonso R ; Remington Joseph P; Belluci Sebastián. (2003.). Remington farmacia. Buenos Aires: Médica Panamericana. Pp.2170

4.https://docs.google.com/document/d/1IStRYXgU2LMyemg7GI0enZuSYGqecjBfocWL_LfYeI/edit